良性脑膜瘤原代细胞培养及脂多糖对其增殖的影响
2021-11-11李云峰张弘池孙昱皓卞留贯王宝锋
李云峰,张弘池,孙昱皓,卞留贯,王宝锋
脑膜瘤是常见的中枢神经系统肿瘤,其发病率为1.3/105~7.8/105,仅次于胶质瘤,约占颅内原发性肿瘤的30%[1-2]。虽然近90%的脑膜瘤为良性肿瘤(WHO Ⅰ级),但由于脑膜瘤常侵犯邻近的软组织或颅骨,或由于生长部位邻近重要结构无法全切,即使Ⅰ级脑膜瘤的复发率也有7%~25%[3]。术后残留或复发的脑膜瘤是外科医生面临的难题,虽然可以采用放射治疗或化学治疗,但患者仍存在较差的预后[4]。目前对于良性脑膜瘤发生发展的研究仍然较少,需要更多的基础研究以寻找新的治疗方法。本研究培养良性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞,并用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对细胞进行处理,检测细胞的增殖活力及炎症因子表达水平;以探讨良性脑膜瘤及柔脑膜原代细胞的培养技术和LPS对细胞增殖的影响,以及炎症与良性脑膜瘤发生发展的机制。
1 材料与方法
1.1 材料 孕19 d的SD大鼠(购于西谱尔-必凯公司),饲养于SPF级环境,人工昼夜节律,自由饮食。待娩出新生鼠后,将新生1 d的SD大鼠用于提取柔脑膜原代细胞。动物实验遵循上海交通大学医学院动物伦理委员会的要求。脑膜瘤标本取自3例经病理检查证实为WHO Ⅰ级脑膜瘤的患者,术中切除的肿瘤标本常温保存送至实验室提取细胞。所有标本获取及后续操作均获得上海交通大学医学院附属瑞金医院伦理委员会同意。
1.2 方法
1.2.1 脑膜瘤及柔脑膜原代细胞提取 根据文献介绍的方法[5-6],用灭菌眼科剪将脑膜瘤标本剪碎成小于1 mm3块状组织,置入37 ℃ 0.25%胰蛋白酶中,37 ℃温箱中消化(根据组织硬度决定消化时间,10~30 min,如组织过硬将无法消化,不能提取细胞),每2~3 min摇晃1次;……
