仇欣霞，陈 荷，冯德龙，董为人

南方医科大学1基础医学院实验教学管理中心，3肿瘤研究所，广东 广州 510515；2南方医科大学第三附属医院神经外科，广东 广州510630

Smo是Sonic Hedgehog（Shh）的下游分子，是Shh信号通路中的关键信号传导因子［1-2］。近期许多研究证实Smo与多种肿瘤细胞迁移有关，Smo抑制剂的小分子药物是肿瘤治疗的新靶点［3］。Shh信号通路负责维持胚胎的正常发育，在胚胎发育过程中对于调控神经干细胞增殖和组织分化发挥重要作用［4-5］。此外，它还在轴突的生长中起到了导向的作用［6］。但关于Smo蛋白调控干细胞增殖和迁移的作用没有直接证据。由此我们推测，调控Smo的活性对神经干细胞的增殖和迁移可能有影响，从而为神经退行性疾病提供新的治疗思路。为了验证这一推测，我们将小分子药物Purmorphamine（PM,Smo 的激动剂）和Cyclopamine（CPM,Smo 的抑制剂）应用于调节Shh信号通路的实验研究中，观察他们对成年神经干细胞（ANSCs）增殖、迁移的影响并探讨可能的作用机制，旨在找寻一种能够有效逆转中枢神经系统退行性疾病进程的新方法［7-8］。

1 材料和方法

1.1 主要材料

大鼠神经干细胞培养液、Accutase消化液、碱性成纤维细胞生长因子（FGF-2）（Milipore）。Purmorphamine、Cyclopamine等试剂（MCE）。ABI 7500 型实时荧光定量PCR 仪（ABI）。倒置显微镜（Olympus），超净工作台（Airtech），细胞培养箱（Thermo）。

1.2 细胞培养

使用实验室已购买的成年大鼠神经干细胞（Milipore）。细胞培养方法参照实验室的前期工作，将冻存的成年大鼠神经干细胞从液氮中取出，迅速置于37 ℃中水浴，解冻后将1 mL的细胞冻存液转移至15 mL的离心管中，缓慢加入9 mL 的培养液并混匀，离心1200 r/3 min。……