朱红军 赵萌

糖尿病视网膜病变、老年性黄斑变性等常见致盲眼底病变均与视网膜新生血管(RNV)形成有关。 RNV的形成对人体危害较大，随着新生血管数量的增多，可能会出现玻璃体积血、视网膜脱离等不可逆转的改变，最终导致视力丧失。Chemerin属于一种脂肪细胞因子，通过与其受体ChemR23相结合作用于相应部位[1-2]。有研究表明[3-4]，Chemerin可能参与糖尿病视网膜病变的发生和发展，血清Chemerin水平升高，糖尿病视网膜病变的严重程度也随之升高，但具体机制尚不清楚。也有研究表明[5-8]，Chemerin能够促进内皮细胞活性氧(ROS)的表达，而ROS介导 MAPK信号通路参与细胞的多种反应，传递细胞外刺激的信号到细胞核，调节细胞的生理和病理进程，在RNV的形成过程中起着重要的调节作用。本研究通过荧光探针-二氢乙啶(DHE)法、MTT法、Western blot、基质胶(Matrigel)法、细胞划痕实验等检测Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的作用，并分析该作用的机制是否与ROS介导的MAPK信号通路有关，以期为Chemerin在脉络膜-视网膜新生血管形成过程中的作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞来源与主要试剂RF/6A细胞购买于美国模式菌种收集中心(ATCC)细胞库。Chemerin购自上海通蔚实业有限公司；ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)检测试剂盒、DHE试剂盒购于江苏凯基生物公司；DMEM培养液(美国Gibco公司)；基质胶(Matrigel)购于美国BD公司；一抗(GAPDH)、二抗购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 细胞培养及实验分组RF/6A细胞复苏后培养于含体积分数10%胎牛血清、100×103U·L-1青霉素和100 mg·L-1链霉素的DMEM培养液中，置于37 ℃、含体积分数5%CO2培养箱中培养。……