李影，于宁，易雪梅，丁杨峰，高芸璐，陆家睛

（上海市皮肤病医院，上海 200443）

吡格列酮属于噻唑烷二酮类药物，是过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferatorsactivatedreceptors γ，PPARγ）的激动剂，不仅可以改善糖脂代谢，增加胰岛素敏感性；而且可以抑制细胞增殖，下调炎性反应[1]。近年来，临床研究发现吡格列酮可以改善银屑病患者的皮损症状[2-5]，但是，具体的机制尚不清楚。本文拟在体外采用不同浓度胰岛素诱导人永生化角质形成（HaCaT）细胞胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）模型，初步探讨吡格列酮对HaCaT细胞IR的影响。

1.材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验细胞 HaCaT细胞，购于中科院细胞库。

1.1.2 实验药物 吡格列酮购于江苏德源有限公司。

1.1.3 试剂和仪器 DMEM高糖培养基（美国Gibco公司）；青霉素-链霉素混合液（Biotopped）；DMSO（Thermo Fisher Scientific）；胎牛血清（美国 ORIGIN公司）；胰岛素（北京索莱宝科技有限公司）；葡萄糖检测试剂盒（北京普利莱基因技术有限公司）；CCK-8试剂盒（上海碧云天生物科技有限公司）；96孔板（美国Corning公司）；AIRTECH超净台；IX71倒置显微镜（日本Olympus公司）；SC3610型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司），酶标仪（Thermo Scientific）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 HaCaT细胞冻存于液氮冷藏系统中，使用时取出进行传代培养。将取出的HaCaT细胞置于37℃的水浴中复苏，在超净台中将离心沉淀后的细胞装入含有DMEM高糖培养基、胎牛血清和青霉素-链霉素混合液的细胞培养皿中。在37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养，待细胞生长至70%～80%融合时进行消化和传代。

1.2.2 HaCaT细胞IR模型的建立 将胰岛素母液稀释为 10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L 5个浓度。取96孔板，将HaCaT细胞均匀接种于96孔板中，每列5个复孔作为一组，每组加入不同含浓度的胰岛素和正常组。……