徐彩,周兰,黄海涛∗,黄文玲,张芸娜,左茜茜

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)在我国被定义为：与同一个性伴侣在妊娠28周内有连续3次及以上的自然胚胎丢失。其发病率占生育期女性的1%～5%[1]。Treg/Th17的表达平衡是目前的研究热点。本团队在前期研究发现，补肾健脾、益气养血安胎中药自拟固胎煎可降低Th17/Treg比例，上调IL-10、TGF-β1的表达水平，下调IL-6、IL-17的表达水平，诱导免疫耐受，降低胚胎丢失率，改善妊娠结局[2]。在此基础上,本研究进一步观察中药自拟固胎煎对RSA小鼠蜕膜组织细胞形态的影响，并检测与Th17、Treg细胞分化机制密切相关的头翼状螺旋转录因子 3(forkhead/pterygoid spiral transcription factor 3，Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体(retinoic acid related nuclear orphan receptor，RORγt)蛋白的表达，继续探讨中药自拟固胎煎对RSA免疫平衡的影响。

1 实验材料

1.1 动物

8～10周龄SPF级CBA/J雌鼠自北京华阜康生物科技有限公司购进，共48只。8～10周龄SPF级DBA/2雄鼠20只，以及同周龄BALB/c雄鼠4只，均自北京维通利华生物科技有限公司购进。

1.2 药物

自拟固胎煎饮片购于北京中医药大学东方医院，药物组成包括：菟丝子、桑寄生、苎麻根、覆盆子、白术等。药物经煎制并减压浓缩,配制成含生药1.425 g/mL中药煎剂,-20℃备用。地屈孕酮片以蒸馏水稀释至浓度1.5×10-4mg/mL，存于-20℃备用。

1.3 试剂

一抗：Foxp3 antibody(英国 Abcam 公司，ab215206)，Rabbit Anti-ROR gamma T antibody(北京博奥森生物技术有限公司，bs-23109R)，内参β-Actin(D6A8) Rabbit mAb(CST，8457S)；二抗：Goat Anti-Rabbit IgG H&L(HRP)(英国 Abcam 公司，ab6721)；SDS-PAGE预制胶套装kit(MDL，911919)；苏木素染液(北京中杉金桥生物技术有限公司，ZLI-9609)。

2 实验方法

2.1 造模及分组

将CBA/J雌鼠与BALB/c雄鼠2：1合笼,建立正常妊娠模型(CBA/J×BALB/c组)作为对照组，CBA/J雌鼠与DBA/2雄鼠2∶1合笼,建立自然流产模型(CBA/J×DBA/2组)。检出阴栓的小鼠计为妊娠第0天。将流产模型小鼠随机分为5组：中药高、中、低剂量组、西药组以及模型组。……