赵晓杰， 布雨鑫， 闫承慧， 刘 丹

北部战区总医院 心血管内科，辽宁 沈阳 110016

TRIM55是近年发现的横纹肌特异性泛素连接酶[1-2]。人TRIM55基因定位在8号染色体上，共含10个外显子，可编码548个氨基酸[3]。TRIM55主要表达于骨骼肌和心脏[4-5]，在心肌和骨骼肌的肌节组装、肌肉结构和功能的维持中发挥重要作用，还可以调控骨骼肌细胞分化、影响心肌细胞线粒体自噬[6-7]。此外，TRIM55点突变与肥厚型心肌病的发病、临床症状密切相关，其多态性位点还与心力衰竭发病有关[8-9]。本研究旨在建立及鉴定TRIM55基因敲除小鼠，为深入阐明TRIM55在心脏和骨骼肌中的作用及机制提供新的工具。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 TRIM55抗体(英国Abcam)；β-actin抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；HRP标记的二抗(美国Jackson Immuno Research)；逆转录试剂盒(日本TAKARA)；蛋白裂解液RIPA(美国Thermofisher Scientific)；引物合成(生工生物工程股份有限公司)。

1.2 实验动物及配繁方案 3只雄性TRIM55杂合子小鼠和10只雌性C57BL/6J小鼠均购于江苏集萃药康生物科技有限公司。首先，将雄性TRIM55杂合子小鼠与雌性C57BL/6J小鼠进行交配，获得雌性TRIM55杂合子小鼠；再将雄性TRIM55杂合子小鼠与雌性TRIM55杂合子小鼠进行交配，以获得TRIM55基因敲除小鼠。

1.3 基因型鉴定 子代小鼠满4周时分笼并打耳钉进行编号。提取鼠耳基因组DNA，具体方法如下：将小鼠耳放于裂解液中(含蛋白酶K)，55℃水浴锅2 h，95℃水浴锅5 min终止消化，13 000 r/min离心5 min，上清即为提取的DNA。然后进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增，引物见表1。反应体系：gDNA Template2 μl，10×Taq master mix10 μl，Primer mix(10 M)1 μl，H2O补至20 μl。反应条件：(1)95℃ 5 min；(2)95℃ 30 s；(3)58℃ 30 s；(4)72℃30 s；(2)～(4)共40个循环；(5)72℃3 min；(6)25℃保持。将扩增后的PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳及基因型鉴定。……