才 艺， 赵晓杰， 张效林， 刘 丹， 田孝祥， 闫承慧

北部战区总医院 心血管内科，辽宁 沈阳 110016

替格瑞洛是我国当前使用较为普遍的抗血小板药物[1-2]，主要经细胞色素 P450 3A4(cytochrome P450 3A4，CYP3A4)代谢，少部分经CYP3A5代谢，其主要代谢产物为AR-C124910XX。体外实验表明，活性代谢产物具有活性，可与血小板P2Y12ADP 受体结合，达到抗血小板作用，活性代谢物的全身暴露量约为替格瑞洛的30%～40%[3-6]。细胞色素P450具有表型多态性与基因多态性的特点，是造成个体药物代谢差异性的主要原因，其中,CYP3A4参与多种药物的代谢过程[7-8]。CYP3A4的表达主要取决于其细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的水平。有研究证实，miR-122-5p在肝组织中大量表达,可作为丙型肝炎病毒相关肝细胞癌的诊断生物标志物，用于诊断肝细胞癌症等作用[9-13]。miR-122-5p对CYP3A4表达具有特异性调控[14-15]，但miR-122-5p对CYP3A4的调控是否与替格瑞洛的代谢存在相关性尚待证实。本研究旨在探讨miRNA-122-5p 是否通过特异性调控CYP3A4的表达，从而影响替格瑞洛的代谢。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞培养和刺激 人正常肝细胞(human normal liver cell，LO2)维持在补充有10% FBS 的 DMEM中，温度为37℃，湿度为5% CO2。采用Lipofectamine RNAiMAX试剂(Invitrogen,Carlsbad，CA)，按照制造商方案将miRNA模拟物(100 nmol/L)、miRNA抑制剂(100 nmol/L)及其对照转染到LO2中。转染后36 h，收集LO2。在miR-122-5p模拟物和miR-122-5p抑制剂转染后，LO2用5 μmol/L替格瑞洛刺激24 h。

1.2 蛋白质印迹法 在转染和处理后，收集6孔板中的细胞，并在冰上用蛋白裂解液制备全细胞裂解物。蛋白质浓度用二喹啉甲酸蛋白检测试剂盒(Boster)测定。全细胞蛋白质(20 μg)在SDS-PAGE上分离并电泳转移到聚偏二氟乙烯膜上。膜与选择性兔抗人CYP3A4多克隆抗体孵育，随后用二抗孵育。使用化学发光试剂使条带在暗室处曝光可视化。……