王 静， 李逸明， 刘 丹， 宋海旭， 闫承慧， 田孝祥

1.北部战区总医院 心血管内科，辽宁 沈阳 110016；2.锦州医科大学研究生院，辽宁 锦州 121001

主动脉疾病包括主动脉夹层和主动脉瘤破裂，急性起病时院内死亡率超过60%[1]。主动脉包括内膜、中膜及外膜三层结构。主动脉平滑肌细胞(smooth muscle cell，SMC)主要位于中膜，是主动脉数量最多的细胞类型之一，对维持主动脉结构和功能完整至关重要[2]。但人主动脉组织难以获得，多数研究采用小鼠或大鼠来源的主动脉SMC替代[3]。这一做法的缺点是忽略了人与啮齿类动物的种属差异，导致很多动物实验结果不能解释人主动脉疾病的发病机制[4]。目前，关于小鼠和大鼠主动脉SMC体外培养的报道较多，而对人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cell，HAoSMC)的分离及培养的研究较少[5]。本研究旨在探讨HAoSMC的体外分离及培养方法，为阐明主动脉疾病的发病机制奠定基础。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人升主动脉组织取自在北部战区总医院接受外科主动脉置换手术的A型主动脉夹层患者。Ⅱ型胶原酶、100×抗生素溶液(每ml含10 000 U青霉素、10 mg链霉素、25 μg两性霉素B)购自美国Sigma Aldrich公司；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自浙江天杭生物科技股份有限公司；DMEM高糖培养基、Alexa Fluor 488标记山羊抗小鼠二抗购自美国Thermo Fisher公司；小鼠抗SM α-actin及SM 22α一抗购自美国Abcam公司；一次性细胞培养皿及培养板购自美国Invitrogen公司。本研究方案获得北部战区总医院伦理委员批准，且患者知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 分离人主动脉中膜 将术中得到的人主动脉组织置于含冰的无菌生理盐水50 ml离心管中，然后将其转移至超净台中操作。……