刘 丹， 宋海旭， 闫承慧， 刘艳霞

北部战区总医院 心血管内科，辽宁 沈阳 110016

心血管疾病严重威胁着人类健康，心力衰竭是多种心血管疾病的终末阶段[1-5]，心肌细胞凋亡、氧化应激障碍、免疫炎症反应和线粒体损伤等多种因素共同参与心力衰竭的发生发展[6-9]，但其关键发病机制尚不十分清楚。因此，阐明心力衰竭的发生机制、寻找到新的干预靶点，将成为心血管领域亟需解决的问题。E1A激活基因阻遏子基因(cellular repressor of E1A-stimulated genes，CREG)是一种重要的心肌保护因子[10-15]。在小鼠心肌缺血再灌注损伤后，心肌组织中CREG蛋白表达明显下降，外源性给予CREG重组蛋白后可通过影响心肌细胞自噬和凋亡显著改善小鼠心肌缺血再灌注损伤[10]。在CREG表达缺失的杂合子小鼠中，给予血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)刺激后，心肌纤维化明显加重，心肌细胞自噬功能障碍[15]。然而，CREG对AngⅡ刺激后心肌细胞凋亡的影响目前尚不清楚。本研究旨在探讨CREG对AngⅡ刺激后心肌细胞凋亡的影响。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 CREG抗体(Abcam公司，英国)，Cleaved-caspase3抗体(剪切型的半胱天冬酶，Cell signaling technology公司，美国)，Bax抗体(Cell signaling technology公司，美国)，Bcl-2抗体(Cell signaling technology公司，美国)，β-actin抗体(北京博奥森生物技术有限公司，中国)，HRP标记的二抗(Jackson ImmunoResearch，美国)，AngⅡ(大连美仑生物技术有限公司，中国)，逆转录试剂盒(TAKARA公司，日本)。

1.2 小鼠原代心肌细胞提取及培养 使用胶原酶和胰酶提取出生1～3 d的小鼠乳鼠原代心肌细胞，使用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。待细胞密度达70%左右时，将细胞分为对照组与AngⅡ组(1μM，刺激24 h)。此外，将CREG过表达的腺病毒(adCREG)及其对照病毒(adcon)加入到细胞上清后再给予AngⅡ刺激，24 h后收集细胞提取蛋白。……