顾 云 张立霞 李淑珂

1 蓬莱区人民医院 山东 蓬莱 265600；2 滨州医学院基础医学院 山东 烟台 264003； 3 滨州医学院烟台附属医院 山东 烟台 264100

流式细胞分选技术是利用流式细胞仪，以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，根据实验需求将目的细胞群分选出来。相对于机械法、免疫磁珠法、单细胞捕获法等传统细胞分离手段，具有分选参数多、分选群体多、分选纯度高、灵活性强等优势[1]，目前越来越多的实验涉及到流式分选，分选颗粒种类也越来越多，有动物细胞、植物细胞[2-5]、微生物[6-8]及人工合成微粒等。要得到一个好的分选结果，在做流式分选的时候，不但要注意分选方案的选择、初始细胞状态、接收管处理等因素[9]，喷嘴的选择也是影响分选结果的一个重要因素。目前常用的喷嘴型号有70、85、100、120等，研究用70，100两种不同型号的喷嘴，观察喷嘴对不同大小的颗粒、不同的荧光染色实验分选的影响。

1 实验试剂、分组与方法

1.1 实验仪器 BDAria III流式细胞仪(BD公司，P64828200134)。

1.2 分选颗粒 BD Calibiite Bead(BD公司，23-3171-07)，Thp-1、H6和人外周血单核细胞(滨州医学院馈赠)。

1.3 实验试剂 人CD41-PE(BD公司，563562)，Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒(BD公司，556547)，Drop Delay Bead(BD公司，5271955)。

1.4 实验分组 BD Calibiite Bead组：选取BD Calibiite Bead中的U，Apc和PE三种荧光微球各100 μL加至3 mL磷酸盐缓冲液中。

Thp-1组：计数5×106个Thp-1细胞，放至60℃水中20 min造成细胞损伤，5 μL Annexin V-FITC和5ul PI染色20 min。

H6组：计数5×106个H6细胞，放至60℃水中20 min造成细胞损伤，Annexin V-FITC 5 μL和PI 5 μL染色20 min。

人外周血单核细胞组： 全血溶红，淋巴细胞分离液分离出外周血中的单个核细胞，加人CD14-PE 5 μL染色30 min。

1.5 统计学方法 应用SPSS 25.0 统计软件对实验数据进行分析。……