郑龙龙 ，张 黎 ，郝思源，郝飞飞，白 瑞，霍乃蕊，郑明学，谭 凡

（山西农业大学动物医学学院，太谷 030801）

白细胞介素（Interleukin，IL）作为细胞因子的一员，是家禽机体固有免疫调节和特异性免疫启动的关键信号。生物活性的IL-2和IL-4蛋白可通过增强目前常见的各类型商品化疫苗免疫反应的过程，诱导产生更加快速、高效、持久的中和抗体，作为一种新的免疫增强剂在疫苗研究领域受到广泛研究与应用。

2018年，本课题组成员贡鑫等［1］成功构建了ChIL-2和ChIL-4的融合基因表达载体 pCI-ChIL-2-ChIL-4-EGFP，作为鸡球虫病三价四株早熟弱毒活疫苗的免疫佐剂。该载体表达分泌的ChIL-4-ChIL-2融合蛋白可增强鸡球虫病活疫苗的免疫保护力，降低活疫苗的副作用。

生物制品从微量的试验阶段进入商业化批量生产阶段，最终进入复杂的田间应用阶段，须验证种质库资源是否能够保持安全、稳定、质量可控的状态［2］。因此，本文通过研究DH5α/pUC57 pCIChIL-2-ChIL-4-EGFP重组菌的形态、生化特性、质粒丢失率、质粒超螺旋比、目的基因稳定性等指标，对后续大规模的生产研究及产品质量控制的建立提供试验数据支撑，对潜在的田间应用具有指导性意义。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

DH5α/pUC57 重组菌和 pCI-ChIL-2-ChIL-4-EGFP重组质粒由山西农业大学兽医病理实验室构建保存。EcoRI （TaKaRa，AGZ0312A）、SalI （Ta-KaRa，AGY1010A）、无内毒素质粒DNA小量抽提试剂盒［生工生物工程（上海）股份有限公司，D629KA5985］、全波长酶标仪（Thermo Fisher Scientific， MultiskanTMFC )、 PCR仪(Bio-Rad，S1000TM）、内毒素检测仪（安度斯生物有限公司，S-0704）。

1.2 试验方法

1.2.1 重组菌株传代

DH5α/pUC57 重组菌使用接种环划线接种于无菌37℃ 溶菌肉汤(lysogeny broth，LB )平板，避光倒置培养12 h，选取单个菌落混合10.0 mL含Amp＋（Ampicillin）的LB液体培养基，作为原始菌（0代）；……