孙临奥 李昌盛 周雪峰

甘氨酸甲基转移酶(glycine N-methytransferase，GNMT)是调节生物甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的肝脏甲基转移酶[1]，在多种癌症中有抑制癌细胞增殖的作用[2]。GNMT的缺失在肝癌的发生发展中起着重要的作用[3]。GNMT同样也被作为前列腺癌的潜在生物标志物[4]。我们对GNMT在肺癌中的作用以及对病人预后评估作用进行研究。

对象与方法

一、对象

2015年6月～2020年6月间我院胸心血管外科收治的肺癌及癌旁组织标本140对，病人平均年龄54.47岁(34～78岁)，男79例，女61例。入组标准：(1)术前未行新辅助治疗；(2)签署手术知情同意书及标本获取知情同意书；(3)由两名以上病理医师做出诊断。TNM分期采用IASLC第八版肺癌分期。均行手术治疗，并经病理检查诊断为肺腺癌 117例，鳞癌 23例。有吸烟史101例，无吸烟史39例，年龄≤55岁63例，年龄>55岁77例。伴有淋巴结转移31例，不伴淋巴结转移109例。肿块直径≥3 cm 48例，肿块直径<3 cm 92例。TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为55例、58例和27例。肿瘤高、中、低分化分别为58例、45例和37例。术后所有病人分别随访6～60个月。

二、方法

1.全部癌旁组织标本均取自于离肿瘤>3 cm处。自病历系统中获取性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、分化程度等临床特征，分析GNMT表达与肺癌病人临床病理特征及预后的关系。

2.实验方法：(1)逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)：所有组织标本离体后立即用液氮罐收集并储存于-80 ℃冰箱中。采用TRIzol提取总RNA，用QuantiFast RT-PCR试剂盒反转录成cDNA，QuantiTect-SYBR-Green-PCR检测Dock10的表达。GAPDH作为内参。GNMT引物序列为：5′-ATGCTGTCATCTGCCTTGGAAAC-3′和5′-GCCTGTACTGAGGATGTGGTCGT-3′，GAPDH序列为：5′-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3′和5′-GCAGGAGGCATTGCTGATGAT-3′。(2)蛋白免疫印迹实验(Western-blotting)：使用RIPA裂解液提取组织总蛋白，用10%SDS-PAGE电泳分离蛋白后转移至PVDF膜。用5%无脂牛奶在TBST中封闭膜30分钟，然后加入相应的一抗GAPDH(Proteintech，货号：10494-1-AP)及GNMT(Proteintech，货号：18790-1-AP)4 ℃下孵育过夜。在TBST中洗涤3次，每次5分钟后，在室温下用2.5%脱脂乳在TBST中与二抗孵育膜1小时。每张……