吴品兴，梁 娜，董红猛，肖舒文，胡永红 (河北师范大学 生命科学学院，河北 石家庄 050024)

长角血蜱(Haemaphysalislongicornis)隶属于节肢动物门(Arthropoda)、蛛形纲(Arachnida)、蜱螨亚纲(Acari)、寄螨总目(Parasitiformes)、蜱目(Ixodida)、硬蜱科(Ixodidae)[1]，在全世界呈广泛性分布[2-4]。长角血蜱作为重要的病原体载体，可引起立克次体病[5]、人单核细胞埃立克体病[6]、犬焦虫症[7]、泰勒虫病[8]及发热伴血小板减少综合征[9]等，对人类健康和畜牧业发展带来极大危害。目前，化学防治仍然是控制蜱类的重要方式[10]，但长期使用会导致环境污染和蜱抗药性的产生[11]，因此，疫苗接种已成为有效的蜱类防治策略之一。

磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase，TIM)是一种催化磷酸二羟丙酮(DHAP)和甘油醛-3-磷酸(GAP)互逆转化的酶，在糖酵解过程中有重要的地位[12]。已有研究证实，刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)[13]、日本血吸虫(Schistosomajaponicum)[14]、微小扇头蜱(Rhipicephalusmicroplus)[15]中TIM对宿主具有免疫保护力，而蜱中相关研究报道甚少。毕赤酵母(Pichiapastoris)是一种工业化的甲基营养型酵母，具有易操作，稳定表达，高密度发酵及翻译后修饰(例如糖基化，多肽折叠和甲基化)的优点[16]，并且在毕赤酵母中表达的重组蛋白不会遇到内毒素污染[17]。因此，本研究采用毕赤酵母表达系统对长角血蜱TIM进行表达和纯化，通过蜱叮咬试验分析免疫保护力，为进一步筛选抗蜱疫苗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物新西兰大白兔(约2 kg)购自河北医科大学实验动物中心。所有动物试验方案经河北师范大学动物伦理委员会批准 (2020LLSC05)。

长角血蜱采集于中国小五台山国家自然保护区。非寄生期蜱放置于恒温培养箱培养(湿度为75%，温度为(25±1)℃)。……