利用Red/ET重组技术构建表达非洲猪瘟病毒CP530R和F317L基因的重组伪狂犬病毒
2021-11-02邵洋洋乔延召赵琪琪李鸿鑫张新珩蔺文成陈伟国谢青梅华南农业大学动物科学学院广东广州510642
孔 洁,邵洋洋,乔延召,赵琪琪,李鸿鑫,张新珩,蔺文成,陈伟国,谢青梅 (华南农业大学 动物科学学院,广东 广州 510642)
自2018年8月以来,我国已有多个省份发生非洲猪瘟(African swine fever,ASF)疫情,ASF给我国养殖行业带来了巨大的挑战。ASF是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的猪的一种急性、烈性传染性疾病[1],鉴于目前该疫病在全球多个国家蔓延,开展疫情防控工作、研发新型ASF疫苗已迫在眉睫。ASFV属于双股线型DNA病毒,具有多层结构和二十面体形态,其基因组编码超过150多种病毒蛋白[2-3]。pp62多聚蛋白是ASFV非常重要的一类结构蛋白,该蛋白可以加工合成两个核心蛋白——p35和p15,存在于病毒颗粒的核壳,由CP530R基因编码合成[4]。研究发现,pp220是病毒内部核心壳的主要成分之一,两种多聚蛋白前期的加工都伴随着病毒的组装,当pp62多聚蛋白的表达受到阻遏,间接影响pp220多聚蛋白的离域化[5],引起病毒工厂中具有不同核心发育水平的异常病毒颗粒积聚。未知蛋白(hypothetical proteins)是指缺少功能注释信息的蛋白[6]。在成熟的ASFV粒子中,目前已检测到68种蛋白质,结构蛋白主要参与病毒的复制和病毒粒子的形成,至今仍未知其功能的蛋白质占30%左右,其中包括F317 L[7]。
伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种急性传染病,临床上能够引起猪的繁殖障碍。该病毒基因组庞大,全长约145 kb,由于病毒感染宿主范围广,且含有多个非必需基因,可供多种外源基因插入并稳定表达[8]。已有研究表明,复制非必需区基因(TK、PK、gE、gI和gG等)能够作为外源基因的插入位点,缺失突变后可使野生株PRV侵入中枢神经系统[9],显著降低病毒毒力。……
