姬红波 姚路静 白瑞锋

肝细胞癌(HCC)是世界范围内常见的消化系统恶性肿瘤，肿瘤疾病相关死亡人数位列全球第四，且东亚地区死亡率最高[1]。肝硬化、病毒感染、黄曲霉素、酒精、吸烟等危险因素与HCC的发病密切相关。随着医学的发展，我国HCC 5年生存率从2005年的10.1%提升到2015年的12.1%，而45岁以上患者5年生存率仍然低于10%[2]。近年来许多针对肿瘤细胞免疫检查点的分子成为抗肿瘤治疗的热门研究方向，如PD1/PD-L1抗体Tremeimumad[3]、Camrelizumab[4]，全人源性免疫球蛋白G4单克隆抗体Nivolumab[5]等在HCC治疗中均表现出较好的抗肿瘤活性和较低的毒性，但临床使用仍需进一步验证。NF2(神经纤维瘤病Ⅱ型)基因是一种抑瘤基因，可通过抑制丝氨酸/苏氨酸激酶PAK1抑制Ras介导的细胞癌变，有研究表明缺乏NF2基因能够促进肿瘤细胞的恶性生长[6]。肿瘤细胞的运动性对肿瘤的增殖和转移能力非常重要，而NF2基因的编码产物梅林(Merlin)蛋白在调节肌动蛋白和细胞骨架的运动中起重要作用，且Merlin蛋白的表达和缺失都会导致细胞运动状态的改变[7]。之前的研究表明，Merlin蛋白在肝癌细胞中的高表达能够促进肿瘤的生长和转移[8]，但目前该蛋白与肝癌易感性、化疗敏感性及预后的关系尚不明确。因此，本研究以HCC患者为对象，检测患者血清Merlin蛋白的表达水平，旨在研究其与HCC的发生发展、化疗敏感性及患者预后之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选择本院肝胆外科2014年2月至2017年2月收治的57例肝脏恶性肿瘤患者作为研究对象。纳入标准：①所有患者均通过组织活检确诊为HCC，临床分期为CNLC Ⅲb期和Ⅳ期无法手术治疗的患者[9]。②患者临床资料完整，包括年龄、性别、病理分级、肿瘤直径等。③患者脏器功能良好，无化疗禁忌证。排除标准：①经诊断排除非HCC和非CNLC Ⅲb期、CNLC Ⅳ期HCC患者。②存在肝功能、肾功能、心功能衰竭的患者，血压及血糖无法控制的患者，出现严重并发症的患者。③诊断后未在我院接受治疗的患者。研究组男性31例，女性26例，年龄为47～73(63.1±7.1)岁，按照1∶1纳入年龄、性别匹配体检健康人作为对照。该研究纳入对象均签署对研究的知情同意书并经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 化疗效果及随访

所有患者均使用奥沙利铂为主的FOLFOX4方案进行化疗，完成3～4个周期的化疗后2周，对患者瘤体大小进行测量并根据WHO实体瘤客观疗效评定标准对化疗效果进行评价：分为完全缓解(complete remission，CR)、部分缓解(partial remission，PR)、疾病稳定(stable diserase，SD)和疾病进展(progressive disease，PD)。以CP与PR之和为总有效率(total effective，ORR)，患者出现PD则判定为无效。所有患者均以出现CR、PR、SD判定为临床获益，表明治疗预后良好，PD则表明治疗预后不良，分析其预后相关因素，并继续以此方案进行化疗。患者生存相关指标采用疾病进展时间(time to progressive，TTP)和患者总生存时间(overall survival，OS)。

1.3 检测患者血清中Merlin蛋白表达水平

健康人体检当天、HCC患者进行化疗前、后采集血清，采用酶联免疫吸附法检测血清中Merlin蛋白表达水平，试剂盒购自上海酶联生物公司，均严格按照试剂盒说明书中规定步骤进行操作。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 血清中Merlin蛋白表达水平比较

HCC患者使用FOLFOX4方案化疗前血清中Merlin蛋白表达平均水平为(79.63±12.35)ng/mL，显著高于健康人的(41.34±7.48)ng/mL；HCC患者化疗后平均水平为(58.97±10.54)ng/mL，与化疗前相比显著降低，差异具有统计学意义(t=9.607，P<0.001)。

2.2 肝细胞癌患者血清中Merlin蛋白表达水平与临床病理特征的相关性

HCC患者血清中Merlin表达水平与患者年龄、性别无关，与患者肿瘤大小、是否淋巴结转移、肿瘤分化程度和外周血甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)水平密切相关，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 HCC患者血清中Merlin蛋白表达水平与临床病理信息的相关性

2.3 肝细胞癌患者化疗后不同效果组血清中Merlin蛋白表达水平的比较

57例HCC患者接受FOLFOX4方案化疗后CR组、PR组、SD组、PD组人数分别为9人、15人、21人、12人，4组受试者血清中Merlin蛋白表达水平分别为(47.64±10.18)ng/mL、(58.63±11.03)ng/mL、(59.79±11.86)ng/mL、(70.43±12.30)ng/mL，整体比较差异具有统计学意义(F=6.823，P<0.001)。

2.4 肝细胞癌患者预后不良影响因素的Logistic回归分析

多因素Logistic回归分析结果显示肿瘤直径、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清中Merlin蛋白水平与肝癌患者预后不良显著相关(P<0.05)，见表2。

表2 肝细胞癌患者预后影响因素的Logistic回归分析

3 讨论

近几年的研究表明，世界每年因HCC死亡的人数约为78万，为死亡率第四的恶性肿瘤，东亚地区HCC死亡率最高，南美最低。我国HCC患者死亡率高，5年生存率低，一经发现常为中晚期，失去最佳手术机会，且易复发和转移[9]。晚期肝癌的主要治疗手段仍为化疗，现在以奥沙利铂为主的FOLFOX4方案被推荐为治疗晚期HCC的一线治疗手段[10]，多项研究表明奥沙利铂化疗联合索拉菲尼能够有效提高患者缓解率和无进展生存期(Progress free survival，PFS)[11]。HCC患者对化疗药物的敏感性与其治疗效果和预后密切相关，而肿瘤多药耐药性是当今肿瘤化疗的重大难题之一。

NF2基因是目前发现的唯一一个和神经纤维瘤Ⅱ型相关的致病基因[12]，目前NF2基因突变超过200种，但任何突变都能够使其编码的Merlin蛋白失活，而NF2基因突变导致的Merlin蛋白失活均参与了乳腺癌、结肠癌、前列腺癌和肝细胞癌等恶性肿瘤的发生发展[13]。Merlin蛋白是一种NF2基因的编码产物，被发现了具有抑制肿瘤生长的功能[13]。Merlin蛋白可作为间接连接F-肌动蛋白、跨膜受体和细胞内效应的支架蛋白，调节受体介导的信号通路，控制细胞生长和增殖[7]。有研究表明Merlin蛋白能够定位并结合CD44，通过与透明质酸竞争性结合CD44抑制了肿瘤的生长，而缺乏CD44结合域的Merlin蛋白突变体由于无法结合CD44而无法抑制肿瘤的生长[14]。但有研究表明Merlin蛋白在恶性肿瘤中发挥抑癌和促癌的双重作用[8]，在肺癌[15]、乳腺癌中[16]Merlin蛋白表达水平明显下降，但在HCC中Merlin蛋白表达水平显著上升，目前和此现象有关的文献研究较少。

本研究使用酶联免疫吸附法检测HCC患者血清中Merlin蛋白的表达情况，结果发现HCC患者血清中Merlin蛋白水平显著增加，与之前的研究结果相吻合[8]；肝癌患者血清中Merlin蛋白水平与患者年龄、性别无关(P>0.05)，但与患者的肿瘤大小、有无淋巴结转移、肿瘤分化的程度和外周血AFP水平密切相关(P<0.05)；HCC患者使用FOLFOX4方案化疗后血清中Merlin蛋白表达水平与化疗前相比显著降低(P<0.001)；对化疗后不同效果组的血清中Merlin蛋白表达水平检测结果发现，Merlin蛋白表达水平随化疗效果的降低明显升高。本研究还通过Logistic回归分析显示HCC肿瘤直径、分化程度、有无淋巴结转移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清Merlin蛋白水平与肝癌患者预后显著相关(P<0.05)。

综合本文的研究结果，Merlin蛋白在HCC患者血清中的表达水平明显高于健康体检者，且表达水平与HCC肿瘤大小、有无淋巴结转移、肿瘤分化的程度和患者外周血AFP水平相关；化疗前后血清中Merlin蛋白表达存在显著差异，且化疗效果越差的患者血清中Merlin蛋白表达水平越高。