郭瑞丽 朱科科 郭宗艳

卵巢癌(ovarian cancer,OC)是妇科恶性肿瘤之一，也是我国女性病死率最高的妇科肿瘤，近五年生存率19%～32%，由于该肿瘤起病部位隐匿且前期无典型症状，因此早期诊出率低，根据相关数据：70%的患者初诊时已为晚期[1-2]。目前其临床诊断多为多普勒超声诊断和标志指标CA125检测诊断等方式，但灵敏度上仍存在局限，且存在误诊和漏诊，因此灵敏度、特异度以及准确性高的乳腺癌标志物是提升该癌症早期诊出率以及总体生存率的主要前提[3-4]。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)是1种促血管生成剂，在正常组织中呈低表达状态，在损伤部位及肿瘤浸润组织中被激活而发挥促血管生成作用[5]。层粘连蛋白(Laminin,LN)是基膜的主要糖蛋白成分，它是肿瘤细胞的重要屏障，肿瘤在转移之前必须将其破坏，因此其与卵巢癌的发生和进展密切相关[6]。本研究选择2018年9月至2020年9于焦作市人民医院进行手术治疗的上皮性卵巢癌患者术后留存的肿瘤标本为研究对象，检测并分析bFGF和LN在上皮性卵巢癌组织中表达的临床意义及与肿瘤血管生成的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象

随机选取2018年9月至2020年9于焦作市人民医院进行手术治疗的上皮性卵巢癌患者术后留存的肿瘤组织及癌旁组织石蜡标本，并分别作为病理组(n=63)和癌旁组(n=63)。病理组中，所有患者均经病理学确诊，且术前未经放、化疗以及免疫治疗；患者年龄30～70岁，平均年龄(51.76±5.22)岁；临床分期(FIGO)：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期36例；病理类型：浆液性囊腺癌34例、粘液性囊腺癌29例；病理分级：高中分化31例，低分化32例；淋巴结转移42例，非淋巴结转移21例。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂 兔抗人bFGF多克隆抗体(购自上海玉博生物科技有限公司，货号LS-C211338)、兔抗人LN单克隆抗体(购自英国Abcam公司，货号：ab11575)、免疫组化(IHC)试剂盒和试剂(购自欣博盛生物科技有限公司，货号：ENS004.120)、鼠抗人CD34单克隆抗体(购自英国Abcam公司，货号：ab185732)。

1.2.2 bFGF和LN阳性表达率检测 采用免疫组化(SP法)检测上皮性卵巢癌组织及癌旁组织中bFGF和LN的表达，取组织石蜡标本，常规脱蜡后，采用bFGF和LN抗体，根据免疫组化试剂盒说明书进行染色，最后采用中性树胶封面，镜下观察并拍照，采用Image Analysis System11.0获取图像中蛋白阳性表达范围占比，结果判定标准见表1，以(-)和(+)作为阴性，(++)和(+++)为阳性。

表1 免疫组化染色阳性判定标准[7]

1.2.3 微血管密度(microvessel density,MVD)检测及计数 检测方法及流程同上，采用CD34抗体。MVD计数：镜下寻找血管密集区域，每个切片取3个视野进行计数求平均值。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 2组bFGF和LN阳性表达率以及MVD值比较

与癌旁组相比，病理组bFGF和LN阳性表达率以及MVD值均显著增加，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 2组bFGF和LN阳性表达率以及MVD值比较

2.2 bFGF和LN在不同临床特征上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率比较

不同临床分期、病理分级以及淋巴结转移情况的上皮性卵巢癌组织中bFGF和LN阳性表达率均具有显著性差异(P<0.05)，而不同病理类型则无显著差异(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期患者bFGF和LN阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者bFGF和LN阳性表达率显著高于高中分化，淋巴结转移患者bFGF和LN阳性表达率显著高于非淋巴结转移患者(P<0.05)，见表3。

表3 bFGF在不同临床特征上皮性卵巢癌组织中的阳性表达比较/例

2.3 不同临床特征上皮性卵巢癌组织中MVD计数比较

不同临床分期、病理分级以及淋巴结转移情况上皮性卵巢癌组织中MVD值均具有显著性差异(P<0.05)，而病理类型则无显著差异(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期患者MVD值显著多于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者MVD值显著多于高中分化，淋巴结转移患者MVD值显著多于非淋巴结转移患者(P<0.05)，见表4。

表4 不同临床特征上皮性卵巢癌组织中MVD值比较

2.4 bFGF和LN表达阳性结果与MVD值相关性分析

相关性分析结果显示：bFGF和LN高表达均与MVD值呈显著正相关(γ=0.673、0.712，P=0.014、0.008)。

3 讨论

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其死亡率居妇科肿瘤首位，其早期发病隐匿且缺乏灵敏度和特异性较高的诊断方法，因此约70%的患者确诊时已为晚期，错过了可进行有效救治的最佳时期[8-9]。上皮性卵巢癌是卵巢肿瘤的一种，约占其50%～70%，是1种化疗敏感性肿瘤，通常半数以上患者化疗后可完全缓解，但其中仍有50%出现复发现象，因此其近五年生存率仅约20%[10-11]。目前医学界仍致力于该肿瘤特异性、灵敏度、准确度高的标志物研究，从而使其早期诊出率及治愈率得到提高。

bFGF是多功能细胞生长因子，可刺激中胚层和神经外胚层细胞以及成纤维细胞的生长，研究显示该生长因子机器手体育癌基因之间存在密切关联，如：叶丽平等研究显示：bFGF可能部分通过CREB调节人卵巢癌CAOV3细胞Bcl-2的表达,参与细胞的生存及增殖调控[12-13]。本研究具体探讨了bFGF在上皮性卵巢癌组织中表达的临床意义及与肿瘤血管生成的相关性，结果显示：与癌旁组相比，病理组bFGF阳性表达率以及MVD值均显著增加(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期患者bFGF阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者bFGF阳性表达率显著高于高中分化，淋巴转移患者bFGF阳性表达率显著高于非淋巴转移患者(P<0.05)，提示：bFGF的表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、病理分级以及淋巴转移等临床特征密切相关，并参与上皮性卵巢癌的发生和进展。

LN是细胞外基质的粘附分子，可调节细胞粘附、分化及迁移能力，目前该蛋白是部分肿瘤细胞侵袭、转移相关机制中的重点研究蛋白之一，病理学研究已证实其与肿瘤细胞转移和侵袭有关[14-15]。本研究中，与癌旁组相比，病理组LN阳性表达率以及MVD值均显著增加(P<0.05)，Ⅲ～Ⅳ期患者LN阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化患者LN阳性表达率显著高于高中分化，淋巴转移患者LN阳性表达率显著高于非淋巴转移患者(P<0.05)，提示：LN的表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、病理分级以及淋巴转移等临床特征密切相关，并通过促进其肿瘤组织血管生成而参与其发生、进展，在这一点上其临床价值与bFGF类似。分析其原因在于：LN受体(67 LR)是1种来自37 kDa前体(37LR)的67kDa蛋白。37/67LR与包括乳腺癌，前列腺癌和结肠癌在内的多种癌症的进展，攻击性和化学疗法复发密切相关。37/67LR转换内皮细胞中的理化和机械传感信号并调节血管生成的能力进一步提高了其促进癌细胞侵袭性的能力[16]。另外，本研究相关性分析结果显示：bFGF和LN的高表达均与MVD值呈显著正相关(γ均>0，P均<0.05)，表明：bFGF和LN的高表达则预示肿瘤组织血管生成能力增强，结合前文结果：bFGF和LN通过促进上皮性卵巢癌组织血管生成而参与其发生和进展。本研究不足之处在于——未将研究结果与患者预后调查结合进行论述，后续将对本研究进行完善。

综上所述，bFGF和LN的表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、病理分级以及淋巴转移等临床特征密切相关，并可能通过促进上皮性卵巢癌组织血管生成而参与其发生和进展。因此未来极有可能在上皮性卵巢癌的早期诊断及治疗中作为靶标分子。