石露露，韩卫南，王 强，许宁宁

（张家口市第一医院药学部，河北 张家口 075000）

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmori‑ary disease，COPD）的特征是气流受限，其与气道对有害颗粒或气体的慢性炎症反应增强有关，临床上尚无特效治疗方法[1]。气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMC）的过度增殖会引起气管功能障碍，并参与气道重塑和气道高反应性[2]。在COPD 患者的支气管分泌物中检测到肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）升高，其可以通过TNF 受体（TNF receptor，TNFR）激活核因子（nuclear factor，NF）-κB，上调靶基因的表达参与炎性反应，如磷脂酶A2 等[3]。近年来研究显示TNF-α/TNFR/NF-κB 途径也可以诱导ASMC的过度增殖[4]。灯盏花素是一种从中草药中分离得到的类黄酮糖苷混合物，其药理作用包括缓解机体高凝状态、调控氧化应激反应和炎性反应等[5]。已有研究显示灯盏花素可以缓解COPD病情并调控患者免疫水平，改善预后[6]，但是灯盏花素缓解COPD 的机制以及其对ASMC 的影响仍不明确。本研究主要基于TNF-α/TNFR/NF-κB 途径探讨灯盏花素对COPD 动物模型气道平滑肌细胞增殖的调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料C57BL/6 小鼠，雄性，4 周龄，湖北省实验动物研究中心，SCXK(鄂)2015-0018。脂多糖（美国Sigma 公司）。香烟（红塔集团，烤烟型）。灯盏花素注射液（神威药业，Z13020778）。小动物肺功能仪（拜安吉）。苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）HE试剂盒（碧云天）。RNAspin Mini 试剂盒（美国GE Healthcare）。Bestar qPCR RT 和Bestar™qPCR 试剂盒（德国DBI Bioscience）。Agilent Stratagene Mx3000P序列检测系统（美国Santa）。一抗和山羊抗兔HRP–IgG二抗（ab205718）（美国Abcam）。PVDF膜（中国香港JS0344，JSENB）。ECL 显色试剂盒（美国Ther‑mo Fisher）。 小鼠ASMC 细胞（美国ATCC 公司）。NF-κB 抑制剂EVP4593（美国Selleck 公司）。5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2'-deoxyuridine，EdU）试剂（RiboBio）。

1.2 建模将45 只小鼠分为3 组：对照组、COPD 组和COPD+灯盏花素组，每组15 只。通过鼻腔滴入脂多糖(LPS)和香烟环……