石艳红，杨爽，马天驰，吴小丽，程小玲，施金荣

（武汉生物制品研究所有限责任公司，湖北 武汉 430207）

0 引言

吸附无细胞百白破联合疫苗用于预防百日咳、白喉、破伤风疾病，武汉公司生产的吸附无细胞百白破联合疫苗具有较好的免疫原性及免疫持久性[1]，联合疫苗的使用不仅能产生相应的疫苗保护并且减少了接种次数。对于细菌类疫苗的生产，疫苗的免疫原性及免疫效果与菌种的遗传稳定性息息相关，因此，本文对生产用菌种破伤风梭状芽胞杆菌、白喉棒杆菌、百日咳博德特氏菌进行遗传学鉴定研究，监测菌株的遗传稳定性，从源头保证疫苗的质量[2]。

原核生物的rRNA按沉降系数分为16S、5S和23S rRNA3种，它们分别含有1540、2，900和120个核苷酸，23S核苷酸含量过多不易分析，几乎是16S核苷酸含量的两倍；5S没有足够的遗传信息并且核苷酸又太少；16S核苷酸长度适中信息量较大且易分析。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列。16S rDNA是细菌的系统分类研究中最常用和最有用的分子钟，功能与结构上具有高度的保守性，素有“细菌化石”之称[3]。16S rDNA约1500bp左右，细菌不同则可变区序列不同，由于恒定区序列基本保守，可利用恒定区序列设计引物，将16S rDNA片段扩增出来，利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种的细菌进行种类鉴定。16S rDNA鉴定步骤包括细菌基因组DNA制备、16S rDNA特异引物PCR扩增、扩增产物DNA纯化测序、序列比对等步骤。是一种快速准确获得细菌种属信息的方法[4]。

1 材料与方法

1.1 材料菌株。破伤风梭状芽胞杆菌CMCC64008、白喉棒杆菌CMCC38007、百日咳博德特氏菌CMCC58003均来源中检院。……