李飞 李兵航 郭悦承 沈波 顾天翊 曲颖 张启迪 蔡晓波 陆伦根

Y-box结合蛋白(YB-1)是一种广泛存在于细菌和人类的高度保守的转录因子，能特异性结合目的基因启动子和增强子内部Y-box序列(CTGATTGGCCAA)，发挥多种重要的生物学功能，包括胚胎发育、细胞增殖、肿瘤的发生和转移等[1-4]。Didier等[5]发现，YB-1可以与人MHC II基因启动子区内含有CCAAT序列的顺式作用原件Y-box特异性结合，并抑制MHC II的转录，发挥负调控转录因子的作用。现已发现，YB-1可以与多种基因启动子或增强子结合，调控相应靶基因的转录，进而调控各种生物学功能[1]。Okamota等[6]发现，YB-1能与p53直接结合，并且在人表皮癌细胞中降低YB-1的表达促进p53的转录。因此，YB-1能通过调控多种基因启动子的转录活性抑制或促进相应蛋白的表达，进而调控细胞增殖。

研究发现，慢加急性暴发型肝炎患者的YB-1主要在肝脏胆管细胞、肝癌细胞(HPC)细胞和肝细胞中高表达。在诱导HPC增殖的小鼠模型中也发现YB-1主要在肝脏HPC中表达。因此，YB-1可能参与调控HPC增殖和肝再生。本研究拟在体外细胞实验中探索YB-1对HPC增殖的影响及其作用机制。

资料与方法

一、实验动物与材料

(一)动物 雄性C57BL/6J 小鼠，4周龄，体质量20～25 g，购自上海必凯实验动物中心,饲养于上海市第一人民医院SPF级实验动物中心。

(二)试剂 William′s E培养基、胎牛血清、L-谷氨酰胺、胰蛋白酶购自美国Gibco公司；胰岛素样生长因子-II、表皮生长因子、胰岛素购自美国Peprotech公司；Trizol购自日本Takara公司；抗YB-1、抗Gli1、抗Gli2、抗Shh、抗C-myc、抗GAPDH抗体均购自美国Abcam公司；抗Cyclin D1抗体购自美国CST公司；GANT61购自美国Selleck公司。……