陈旭青， 周龙云， 史 军， 吴继勇， 严芮雯， 严道南， 马华安△

（1南京中医药大学附属医院耳鼻喉科，江苏南京 210029；2南京医科大学第一附属医院康复医学中心，江苏南京 210029）

自然杀伤（natural killer，NK）细胞是人体非特异免疫系统的组成部分，具有分泌系列细胞因子的潜能［1-2］，其所处微环境不同，细胞因子分泌不一，而发生NK1 或NK2 型活化［3］。研究表明，NK 细胞NK2 型活化释放Th2型因子，协调T、B 细胞等介导Th2型反应，与多种变应性疾病发生发展密切相关［4-5］，但其异常活化内在机制及调节因素尚不明确。

线粒体是高度动态的网管状细胞器，通过频繁地分裂、融合以维持内部稳态，其分裂/融合动态失衡、结构紊乱与多种细胞功能紊乱密切关联［6］。近年研究显示，线粒体动态失衡、分裂亢进与NK 细胞异常活化密切相关［7-8］。线粒体分裂抑制剂1（mitochondrial division inhibitor-1，Mdivi-1）为特异性调控线粒体动态变化的通用分子，对线粒体过度分裂触发的T 细胞、巨噬细胞等免疫细胞功能紊乱具有重要作用［9-10］。基于此，本研究拟选取Mdivi-1 这一选择性线粒体分裂抑制剂，探讨调控线粒体动态变化对NK细胞活化的影响。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 主要仪器 Herocell 180 型CO2培养箱（Thermo）；ELx 800 型酶标仪（BioTek）；ChemiDoc XRS 型化学发光凝胶成像仪和CFX96 Touch 型实时定量PCR 仪（Bio-Rad）；Accuri C6 型流式细胞仪（BD）；DMI 3000B 型倒置荧光显微镜和SP8 型激光共聚焦显微镜（Leica）。

1.2 主要药品与试剂 Mdivi-1（货号M0199）购自Sigma-Aldrich；重组人胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP；货号300-62）购自PeproTech；α-MEM 培养基、马血清（horse serum，HS）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）和巯基乙醇（货号11900024、16050122、10100147 和614272）购自Gibico；肌醇、叶酸和PBS 粉末（货号A600536、A610466 和B040100）购自生工生物工程股份有限公司；Trizol（货号15596018）购自Thermo；反转录试剂盒（货号RR036A）购自TaKaRa；……