丁鑫 何奕德 张玉梅

现有研究证实，巨噬细胞在种植体周围炎的免疫-炎症反应中具有重要作用，其吞噬功能和高度的可塑性，在维持机体免疫环境稳态中起到了重要作用[1]。其中，牙龈卟啉单胞菌是种植体周围炎的主要致病菌之一，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是其外壁的组成部分，作为一种内毒素可以与细胞膜中的Toll样受体结合，并激活下游与炎症反应相关的NFκB、MAP等激酶，从而引起炎症反应[2-3]。本课题组前期研究证实，钛表面纳米形貌对巨噬细胞极化具有调控效应[4-5]，但炎症环境下形貌因素对巨噬细胞极化的调控作用是否有所改变仍不清楚。对炎症环境下钛纳米形貌对巨噬细胞的极化状态及炎症相关因子分泌的影响进行研究，以期为生物材料的设计和有效避免种植体周围炎的发生提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料、试剂和仪器

医用级纯钛试样(99.9%，直径14.5 mm，厚度1 mm,西北有色金属研究院)；小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 细胞 (ATCC®TIB-71TM，美国)；碳化硅金相砂纸 400～7 000 目(Matador，德国)；氢氟酸、丙酮、乙醇(天津富宇化工有限公司)；去离子水(第四军医大学口腔医院药剂科)；脂多糖(上海源叶生物科技有限公司)；DMEM培养基、胎牛血清(Gibco，美国)；青霉素、链霉素、胰蛋白酶(Sigma，美国)；多聚甲醛、戊二醛、六甲基二硅胺烷(天津天力化工)；Trizol@Regent、Prime ScriptTMRT Master Mix、 SYBR®Premix Ex Taq TMII、DEPC水(Takara，日本)；抗体(CD86-FITC，CD206-PE-Cyanine7，Rat/IgG2a-FITC Isotype Control，Rat/IgG2b-PE-Cyanine7 Isotype Control)(Invitrogen，美国)；Fixation Buffer、Permeabilization Wash Buffer(Bio Legend，美国)；引物合成(西安擎科生物技术有限公司)；Elisa检测试剂盒(江苏晶美生物科技有限公司)； 阳极氧化电源(北京大华无线电仪器厂)；CO2恒温细胞培养箱(Thermo，美国)；场发射扫描电镜(HITACHI，日本)；……