潘 颖 杨 凯 王传博

(1安徽医学高等专科学校；2安徽医科大学第二附属医院 安徽合肥 230601)

聚乙二醇干扰素(pegylated interferon，PEG-IFN)是治疗慢性丙型肝炎的重要药物。它通过与细胞表面受体结合后引起酪氨酸酶磷酸化激活JAK-STAT信号转导途径，最终诱导细胞产生多种抗病毒蛋白表达，如抗粘病毒A蛋白(MxA)、双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)、抗粘病毒B蛋白(MxB)和2'-5'寡腺苷酸合成酶(2'-5'OAS)等，而发挥抗病毒作用[1-2]。然而，临床上单独使用聚乙二醇干扰素治疗慢性丙肝疗效并不理想，仅有30～40%的患者能获得持久抗病毒应答；聚乙二醇干扰素与利巴韦林联合治疗慢性丙型肝炎能显著提高患者的持续应答率[3]，提示利巴韦林可能影响干扰素信号转导途径，从而提高干扰素抗病毒活性。为此，该实验将以人肝癌细胞HuH7.5.1细胞为细胞模型，运用WB技术逐步分析各实验组细胞内干扰素JAK-STAT信号转导途径因子p-STAT1、STAT1、抗病毒蛋白PKR的表达量以及RAS/MARK信号通路活化蛋白ERK1/2的水平，以揭示利巴韦林是否能通过干扰素JAK-STAT信号转导途径影响聚乙二醇干扰素诱导的抗病毒蛋PKR的表达。该研究为揭示聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙肝的抗病毒机制提供理论和实验依据。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验材料与试剂 HuH7.5.1细胞购于上海富衡生物科技有限公司，聚乙二醇干扰素购自厦门特宝生物，利巴韦林购自上海丰禾制药有限公司，DMEM培养基购自Sigma公司，细胞裂解液购自碧云天公司，SDS、Tris、Tween-20购自北京索莱宝科技有限公司，兔抗人STAT1抗体、兔抗人磷酸化的STAT1抗体购自Abcam公司，兔抗人PKR、兔抗人磷酸化PKR、兔抗人p-ERK购自CST公司，β-actin、山羊抗兔IgG购自Zsbio公司，ECL超敏发光试剂盒购自Thermo公司。……