刘先宁，汪 耀，潘士印，肖湘华，银 勇，王亚妮，刘 睿，朱秀萍，赵 明

（西安市第一医院，陕西省眼科研究所，陕西省眼科学重点实验室，陕西省眼科疾病临床医学研究中心，西北大学附属第一医院，西安 710002）

间充质干细胞（mesenchymal stem cells， MSCs）具有促进组织再生加速创面愈合的能力，可通过调节先天及获得性免疫细胞的增殖功能抑制机体的炎症反应， 具有自我更新、多向分化、较低免疫原性。研究发现，MSCs 不仅广泛存在于骨髓、胎盘、羊膜组织中，而且在脂肪组织、脐带血、外周血、骨骼肌、肝脏、牙龈和牙齿组织、皮肤、乳汁、软骨、角膜缘基质中亦可分离出MSCs[1]。近年来研究表明，MSCs 可通过旁分泌产生外泌体，外泌体具有与其来源的MSCs 相似的促进组织修复、抗炎、免疫调节、抗凋亡、神经保护等特性。外泌体为双层脂膜结合的纳米囊泡，大小在30～150 nm 之间，含有多种生物活性分子（如蛋白质、脂质、mRNA，microRNA 和DNA 等），是介导细胞通讯的关键性分泌因子，在细胞间转移生物活性分子，在创伤愈合和炎症转归等过程中发挥重要作用[2]。本文作者及其项目团队在前期分离出人角膜基质间充质干细胞（human corneal stromal mesenchymal stem cells，HCS-MSCs）的基础上，成功分离制备出HCSMSCs 外泌体，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料来源 HCS-MSCs来源于西安市第一医院、陕西省眼科研究所分离培养并已鉴定的保存细胞。

1.2 主要试剂与仪器 MSCs 培养基试剂盒stempro RMSC SFM（ 美国Invitrogen 公司），0.067mol/L PO4（美国HyCLone 公司），CO2恒温培养箱（美国Thermo 公司），倒置显微镜（日本OLYMPUS），15ml 离心管、细胞培养皿（美国HyCLone 公司），超速离心机（美国贝克曼库尔特公司，OptimaXPN型），纳米透射电……