唐月明，伊 洁

（中国医学科学院北京协和医院检验科，北京 100730）

在许多感染性疾病中，病原体的量化已经被证明是一项有用的预后指标和监测治疗反应的重要参考。实时荧光定量多聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）作为二代核酸检测方法，已在实验室被广泛使用。它通过在反应体系中加入荧光标记的探针来实时检测荧光信号，借助荧光曲线的循环阈值（cycle threshold，Ct）和标准曲线来定量起始靶基因的浓度，为相对定量技术。这种方法能有效测定对数拷贝数，动态范围宽，但由于很多因素都会影响qPCR 的效率，比如在低拷贝靶分子（如病原体本身含量低或者部分患者在检测前已使用抗生素治疗）、复杂模板背景（如大量人基因组会干扰引物和探针的特异度反应、qPCR 抑制物存在）、扩增效率低下（靶基因具有多态性却使用统一的探针及引物）、探针保存不当导致部分降解、标准品和标准曲线偏斜等情况下，其Ct值都会受到影响，因此qPCR 的准确度和精密度可能会有很大的差异[1]。除此之外，缺乏绝对定量值来校准标准品，导致qPCR 结果不精密度高及各实验室之间的可比性差。所以qPCR 作为临床常规检测技术存在不足之处，尤其是在复杂背景下检测低含量的靶基因时，需要更加敏感和稳定的方法检测。数字聚合酶链反应（digital PCR，dPCR）作为一种新的准确定量技术，在基因的绝对定量检测中得到广泛应用，尤其是对微量样本的绝对定量。

现将dPCR 技术的特点、优势及在病原微生物检测中的应用综述如下。……