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4-羟基芝麻素通过抑制p38MAPK/NLRP3信号通路减轻BV2小胶质细胞神经炎症损伤

2021-10-14黄贞伟张小琴

中国药理学通报 2021年10期

张 庆,倪 林,黄贞伟,张小琴,林 埔

(1.福建中医药大学药学院,福建 福州 350122;2.福建农林大学植物保护学院,福建 福州 350002)

4-羟基芝麻素(4-hydroxysesamin)属于双四氢呋喃木脂素类成分,存在于叶下珠、黄荆、香樟等中药中。以芝麻素为代表的双四氢呋喃类成分具有抗肿瘤、抗脑卒中等作用[1-2],但有关4-羟基芝麻素对神经炎症反应的抑制作用及可能机制未见报道。因此,本实验以课题组前期从香樟中获得的4-羟基芝麻素为研究对象[3],采用LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症模型,探讨其对小胶质细胞神经炎症反应是否具有保护作用及可能作用机制,从而为从中药中寻找神经保护类药物提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 药品及主要试剂4-羟基芝麻素(由福建农林大学植物保护学院倪林副教授提供,纯度>98%);脂多糖(Sigma,批号:L2630);caspase-1 p20(SANTA CRUZ公司,批号:SC-398715);IL-18(ab207323)、NLRP3(ab263899)均购自abcam公司;p38(8690S)、Phospho-p38(4511S)、COX-2(12282)、兔二抗(7074)均购自CST公司;鼠二抗(北京全式金生物技术有限公司,批号:HS101-01)。

1.2 主要仪器光学显微镜(Thermo Fisher公司);酶标仪(TECAN公司);7900H荧光定量PCR仪(Applied Biosystems公司);电泳仪、化学发光成像仪(BIO-RAD公司)。

1.3 药物制备精密称取4-羟基芝麻素适量,溶于含20% DMSO的磷酸盐缓冲液中,配制成浓度为100 mmol·L-1的母液备用。

1.4 细胞培养复苏BV2小胶质细胞(中国典型培养物保存中心),培养于DMEM完全培养基中每天换液、隔天传代,供后续实验使用。

1.5 MTT法检测BV2小胶质细胞存活率将BV2小胶质细胞分为正常对照组(C)、LPS模型组(100 ng·L-1)、4-羟基芝麻素低剂量组(10 μmol·L-1,4-hydroxysesamin-L)、4-羟基芝麻素中剂量组(20 μmol·L-1,4-hydroxysesamin-M)、4-羟基芝麻素高剂量组(40 μmol·L-1,4-hydroxysesamin-H)。采用MTT法检测细胞存活率。

1.6 ELISA法检测BV2小胶质细胞中IL-6、IL-1β的含量将BV2小胶质细胞接种于6孔板中,分组同“1.5”。采……

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