赵宇涵，康小龙，何承辉

(1.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830000；2.新疆维吾尔自治区中医医院，新疆 乌鲁木齐 830002；3.新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐 830004)

系统性硬皮病(systemic scleroderma，SSc)是一种慢性自身免疫性疾病，其特征表现为皮肤和内部器官的纤维化以及血管病变[1]。SSc死亡率极高，但尚未完全解释其发病机制[2]。本课题组从刺山柑(CapparisspinosaL.)中提取了有效成分刺山柑总生物碱，在前期研究中，我们采用ELISA实验检测了SSc模型小鼠血清中Wnt相关蛋白Wnt10b的含量，发现刺山柑总生物碱可降低Wnt10b表达[3]，采用ELISA实验检测SSc模型小鼠皮肤组织中Wnt1、Wnt2、Wnt3a的蛋白表达，发现刺山柑总生物碱可降低Wnt1、Wnt2、Wnt3a的蛋白表达；采用qRT-PCR法检测了模型小鼠皮肤组织中β-catenin mRNA的表达，免疫组织化学法检测了模型小鼠皮肤组织中β-catenin蛋白的表达，发现刺山柑总生物碱可降低β-catenin mRNA蛋白的表达[4-5]。为了确保实验严谨性，避免假阳性，进一步探讨刺山柑总生物碱对SSc Wnt通路的作用，本研究将采用更加准确的q-RT PCR方法检测其对SSc小鼠Wnt通路中Wnt2 mRNA的表达，采用Western blot方法验证其对SSc小鼠Wnt通路中Wnt3a及β-catenin蛋白表达的影响。

1 材料与仪器

1.1 试验动物90只SPF级BALB/c雌性小鼠，合格证号：SCXK(京)2016-0006，体质量(18-22)g，北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 试验药物刺山柑购于新疆麦迪森维药饮片厂；盐酸博莱霉素注射剂(批号：17001711，规格：1.5万U)，海正辉瑞制药有限公司；青霉胺片(批号：052160901，规格：125 mg/100片)，上海上药信谊药厂。

1.3 试验试剂SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(批号：20181119)、脱脂奶粉(批号：702F0511)、Lowry法蛋白浓度测定试剂盒、SABC(IgG)-POD试剂盒(批号：20200929)(北京索莱宝科技有限公司)；……