夏淑英，康兴东，康爱华，肖绍川，旷春兰，张小梅，贾天亮，刘厚权

（江西普正制药股份有限公司，江西 吉安343100）

穿王消炎胶囊处方由穿心莲和了哥王二味中药组成。穿心莲药材为爵床科穿心莲属植物穿心莲[Andrographis paniculata(Burm．f．)Nees]的干燥地上部分，收载于《中国药典》2020年版[1]，其化学成分主要为二萜内酯类化合物和黄酮类化合物，脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲内酯及14-去氧穿心莲内酯等二萜内酯类化合物是主要的活性成分[2]，有较好的抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤和抗心血管疾病等作用[3，4]。了哥王为瑞香科荛花属植物南岭荛花（Wikstro-emia indica C.A.Mey.）的干燥根或根皮，具有消炎解毒的功效，主要成分为香豆素类和总黄酮类，其有效成分西瑞香素具有抗炎等多种药理作用[5,6]。穿王消炎胶囊具有消炎解毒的功效，临床常用于治疗痰热咳喘、腹痛以及急慢性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎、急性肠胃炎和急性菌痢等疾病。本研究拟选择穿王消炎胶囊处方药材穿心莲和了哥王的特征性成分进行定性分析，建立穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱方法[7]，保障穿王消炎胶囊产品品质稳定均一。

1 仪器与试药

1.1 仪器设备

美国安捷伦1260型高效液相色谱仪（含G1311C四元泵、G1314F检测器及G1329B自动进样器）；BSA224S-CW万分之一电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；9960D型超声波清洗仪（CBL科贝尔）。

1.2 试剂与试药

穿心莲内酯对照品（110797-201108）和脱水穿心莲内酯对照品（110854-201710）购自中国食品药品检定研究院；乙腈购自西陇化工股份有限公司为色谱纯；甲醇购自天津市恒兴化学试剂有限公司；磷酸购自天津市富宇精细化工有限公司；水为自制超纯水。10批穿王消炎胶囊（批号：190101、190401、190701、190702、190901、191101、191102、200201、200301和200401，规格为0.44g/粒）均为江西普正制药有限公司生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

选择依利特ODSC18色谱柱（4.6mm 250mm，5m），以乙腈为流动相A，以0.2%磷酸溶液为流动相B[8]，梯度洗脱：0~20 min，10%~20%乙腈；20~55 min，20%~35%乙腈；55~70min，35%~44%乙腈；流速为1.0mL/min，检测波长为270 nm；进样量10L；理论塔板数按脱水穿心莲内酯峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯对照品适量，以甲醇为溶剂配制成1.0 mg/mL的脱水穿心莲内酯溶液和0.2 mg/mL的穿心莲内酯溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取穿王消炎胶囊内容物0.4 g，置于具塞锥形瓶中，加入40mL甲醇，超声20min，放冷后滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性试验 分别精密量取浓度为1.048 mg/mL的脱水穿心莲内酯对照品溶液和0.2062mg/mL的穿心莲内酯对照品溶液，用甲醇配成浓度分别为209.6g/mL、157.2g/mL、104.8g/mL、52.4g/mL、31.44g/mL、20.96g/mL和10.48g/mL的脱水穿心莲内酯对照品溶液和41.24g/mL、30.93g/mL、20.62g/mL、10.31g/mL、6.186g/mL、4.124g/mL和2.0628g/mL的穿心莲内酯对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，脱水穿心莲内酯对照溶液得线性回归方程y=1.135 3x+0.084 1，R2=0.999 9，穿心莲内酯对照溶液得线性回归方程y=0.619 3x-0.023 6，R2=0.999 9。结果表明，脱水穿心莲内酯浓度在209.6~10.48g/mL间时，与峰面积呈良好线性关系，穿心莲内酯浓度在41.24~2.062g/mL间时，与峰面积呈良好线性关系。

2.4.2 精密度试验 按“2.3”下供试品溶液制备方法制备1份穿王消炎胶囊供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定，获得的指纹图谱数据用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》相似度软件2012年版进行数据分析，结果显示，其脱水穿心莲内酯峰面积的RSD值为0.13%，指纹图谱相似度均值超过99%，表明该方法精密度良好。

2.4.3 重复性试验按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备穿王消炎胶囊供试品溶液平行样6份，按“2.1”项下色谱条件进样，测定，获得的指纹图谱数据用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》相似度软件2012年版进行数据分析，结果显示，其脱水穿心莲内酯峰面积的RSD值为2.08%，指纹图谱相似度超过99%，表明该方法重复性较好。

2.4.4 稳定性试验按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备穿王消炎胶囊供试品溶液1份，并在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、18 h和24 h后进样，测定，获得的指纹图谱数据用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》相似度软件2012年版进行数据分析，结果显示，其脱水穿心莲内酯峰面积的RSD值为1.12%，指纹图谱相似度超过99%，表明该产品在24 h内稳定性较好。

2.5 峰归属

2.5.1 了哥王药材溶液制备取了哥王药材适量，加水煎煮2次，每次5 h，合并煎煮液，滤过，浓缩后减压干燥成浸膏状，取膏状了哥王1 g，加甲醇100 mL溶解，滤过，取续滤液，即得。

2.5.2 穿心莲药材溶液制备取穿心莲药材适量，置于具塞的锥形瓶中，加40%甲醇25 mL浸泡60 min，再超声30 min，滤过，取续滤液，即得。

2.5.3 共有峰的确定结果见图1。由实验可知，峰1、2、3、4、7、9、11为穿心莲药材专属峰，峰5为了哥王药材专属峰，峰6、8为穿心莲药材、了哥王药材的共有峰。

图1 穿王消炎胶囊峰归属Fig.1 The peak attributions of the Chuanwang xiaoyan capsules

2.6 穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱的建立

按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备10批不同批次穿王消炎胶囊样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，测定，获得的穿王消炎胶囊指纹图谱数据用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》相似度软件2012年版分析，选取峰面积较大且分离度较好的11个色谱峰作为穿王消炎胶囊指纹图谱共有特征峰，再通过多点校正，中位法生成10批穿王消炎胶囊指纹图谱共有模式图（图2），并建立穿王消炎胶囊的对照指纹图谱（图3），相似度结果见表1。10批穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱相似度均超过95%，说明10批穿王消炎胶囊产品的批间质量稳定性良好。

表1 穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱相似度Table 1 The HPLC fingerprint similarity of Chuanwang xiaoyan capsules

图2 10批穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱共有模式Fig.2 The common pattern of fingerprints for 10 batches Chuanwang xiaoyan capsules

图3 穿王消炎胶囊对照指纹图谱Fig.3 The Fingerprint of Chuanwang xiaoyan capsules

3 讨论

3.1本研究对不同供试品制备方法进行了对比考察，分别采用超声20 min、超声30 min、超声40 min、加热回流1 h、浸渍超声20 min等5种不同的提取方式进行提取，结果表明超声提取、加热回流提取和浸渍超声提取效果差异不大，故选择最为简便的超声提取，最佳超声提取时间20 min。

3.2穿王消炎胶囊中了哥王药材高效液相特征成分未知，为确保色谱条件中270 nm的检测波长适用性，本研究对了哥王药材专属峰进行紫外光谱扫描，该特征峰峰值在266.5 nm，采用270 nm比较适宜。

3.3本研究采用HPLC法建立穿王消炎胶囊的指纹图谱，并对共有峰与药材的相关性进行了研究，能简便地鉴别处方中的穿心莲和了哥王药材，使穿王消炎胶囊生产质控具有较好的可追溯性，有利于保障产品临床疗效。

3.4本研究建立的穿王消炎胶囊HPLC指纹图谱方法进行了线性试验、精密度试验、重复性试验、稳定性试验等方法学验证，确认了方法的可行性；10批不同批次的穿王消炎胶囊样品指纹图谱的相似度均超过95%，说明穿王消炎胶囊产品的质量稳定性和均一性较好。

3.5本研究未对了哥王药材的特征峰未进行结构确证，具有一定局限性，了哥王药材中含有香豆素类等成分，其中西瑞香素具有较好的抗炎活性，后续可结合药效实验等进一步研究穿王消炎胶囊指纹图谱与抗炎活性的谱效关联关系。