王 鹏 刘邦鑫 张剑宁 陈金辉 常洪波 杨 晨

胶质母细胞瘤（glioblastoma，GBM）是侵袭性极强的颅内恶性肿瘤，即使采用手术联合术后放化疗等综合治疗，中位生存时间仅14 个月[1]。GBM 高表达血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），理论上抗VEGF 治疗具有良好效果，但Ⅲ期临床试验（AVAglio 和RTOG 0825）表明，贝伐珠单抗（bevacizumab，Bev）、放疗和替莫唑胺的联合治疗方案，并未提高新诊断的GBM病人总生存期[2，3]。并且，抗VEGF靶向治疗后，胶质瘤细胞的侵袭能力明显增强[4，5]。高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）可抑制基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）的表达，从而抑制肿瘤细胞的浸润[6～9]。另外，HBO 可直接抑制肿瘤细胞增殖或通过提高放化疗的敏感性，在多种肿瘤的治疗中发挥作用[10～12]。本文探讨Bev联合HBO对小鼠GBM的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 细胞培养GBM 细胞系U251 细胞（中国人民解放军空军军医大学神经外科研究所章翔教授惠赠）用含10 ml/L 胎牛血清（美国Gibco 公司）的DMEM（美国Hyclone公司）培养基培养。

1.2 MTT 法检测Bev 作用浓度 将U251 细胞接种至24 孔板，每孔1×104个细胞，1 d 后（细胞贴壁），加入不同浓度Bev（0、2、4、6、8、10 mg/ml）。继续培养2、4、6 d，MTT试剂盒（美国Sigma公司）测定吸光度值，绘制细胞生长曲线，确定后续实验Bev的浓度。

1.3 分组及处理 将U251细胞分为4组：对照组、Bev组、HBO 组和Bev+HBO 组。HBO 处理方案：采用烟台豪特氧业设备有限公司的动物实验舱，按操作说明，在30 min内稳定升高至0.2 MPa，持续60 min，然后在30 min 内降至常压后出舱，加压时注意氧舱温度不超过37℃。对照组不进行任何处理；Bev组加入6 mg/ml的Bev作用24 h；HBO组接受1次HBO治疗；Bev+HBO组在加入6 mg/ml的Bev作用24 h后，接受HBO 治疗1 次。在HBO 组和Bev+HBO 组接受HBO治疗时，对照组和Bev组细胞从孵箱取出，放于室温（25 ℃）120 min。

1.4 MTT 法检测细胞增殖能力 将U251 细胞接种至24 孔板，每孔1×104个细胞，每组接种9 孔。……