龚铭杰 黄 炜 施振华 王君祥

颅脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是目前导致成年人群意外死亡的主要原因之一[1]。颅脑CT是临床诊断TBI的基础。Rotterdam CT评分对预测TBI预后有一定的临床价值[2]。炎症反应是导致TBI 继发性损伤的机制之一[3]。外泌体微小核糖核酸（microRNA，miRNA）可以通过模式识别受体（pattern-recognition receptor，PRR）参与炎症反应[4，5]。研究发现miR-212/132 在中枢神经系统中呈高度表达，与突触可塑性、记忆形成和神经突生长有关[6]。本文探讨血浆外泌体miR-212、miR-132 水平与TBI病人损伤程度和Rotterdam CT评分的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 前瞻性收集2019 年3 月～2020 年10月收治的TBI 共76 例，其中男43 例，女33 例；年龄18～79 岁，平均（48.70±14.32）岁；交通事故伤36 例，高空坠落伤18例，异物打击伤9例，其他原因13例；轻型19例，中型35例，重型22例。排除合并阿尔茨海默病、帕金森病、脑部肿瘤或其他器质性脑综合征等以及酗酒或滥用药物病人。另外，选取我院体检38例健康成年人作为对照，其中男21例，女17例；年龄18～78 岁，平均（49.80±15.91）岁。本研究获得我院医学伦理委员会批准。

1.2 血浆外泌体miR-212、miR-132 的检测 收集全血样本，2 h 内以3 000 转/min 离心10 min（4 ℃），收集血浆-80 ℃保存备用。血浆解冻后，3 000 转/min离心5 min，去除循环细胞或碎片。取上清液50 μl，加入外泌体提取试剂10 μl，4 ℃孵育30 min，然后室温1 000 g离心10 min，使用缓冲液重悬沉淀，得到血浆外泌体。使用电镜观察外泌体提取情况。免疫印迹法鉴定外泌体表面特异性抗原表达[7]。

取200 μl 血浆外泌体样本，用TRIzol 试剂提取总RNA，PrimeScript First-Strand cDNA 合成试剂盒（日本Takara公司）逆转成cDNA。取2.0 μl的cDNA模板和cDNAs PrimeScript RT Master Mix 试剂盒（日本Takara 公司）进行PCR 反应：95 ℃、15 min，94 ℃、15 s，55 ℃、30 s，70 ℃、1 min，40 个循环。miR-212正向引物5'-GGCACCTTGGCTCTAGACTG-3'，反向5'-GTCGGTGGCCGTGACTG-3'。miR-132 正 向 引物5'-CGACCATGGCTGTAGACTGT-3'，反 向5'-GTCTCCAGGGCAACCGTG-3'。U6 和18S rRNA 作为内源性对照。用2-△△CT法计算相对表达量。……