张俊华，高云，马卫国，许青霞

(郑州大学附属肿瘤医院 检验科，郑州 450008)

实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是多发性硬化(multiple sclerosis，MS)的理想动物模型[1]。MS是主要由T细胞介导的自身免疫性疾病，其中CD4+T细胞在疾病发展过程中发挥重要作用[2]，同时CD8+T细胞甚至B细胞在EAE发病过程中的作用也逐渐被发现[3]。胸腺是T细胞分化发育成熟的主要器官[4]，T细胞在胸腺内的分化发育可分为3个阶段：即CD4CD8双阴性(double negative，DN)细胞阶段；CD4CD8双阳性(double positive，DP)细胞阶段；CD4单阳性(CD4 single positive，CD4SP)或CD8单阳性(CD8 single positive，CD8SP)细胞阶段，它们是由DP细胞经阳性和阴性选择而分化发育成熟的具有免疫功能的T细胞。已有研究发现，存在胸腺的EAE小鼠在发病高峰期后会有自发恢复期，而摘除胸腺的EAE小鼠将缺失自发恢复期，此现象提示胸腺对EAE小鼠具有免疫调节作用[5-6]。因为关于胸腺对EAE发病机制作用的报道甚少，本研究将探索EAE小鼠胸腺细胞亚群变化，以阐述EAE小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG)特异性胸腺细胞的分化机制，进而为EAE的发病机制研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料6～8周龄C57BL/6小鼠25只，体质量20～25 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养在中美(河南)荷美尔肿瘤研究院SPF级动物房中。MOG35-55(肽序列：Met-Glu-Val-Gly-Trp-Tyr-Arg-Ser-Pro-Phe-Ser-Arg-Val-Val-His-Leu-Tyr-Arg-Asn-Gly-Lys)，纯度98%，购于上海吉尔生化公司；弗氏完全佐剂(complete Freund's adjuvant，CFA，灭活结核分枝杆菌含量5 mg/mL)购于上海三踏生物科技有限公司；百日咳毒素(pertussis toxin，PT)购于北京联立信生物技术有限责任公司；大鼠抗小鼠抗体CD4-FITC、CD8-PE购于eBioscience公司；Annexin Ⅴ/碘化丙啶(propidium iodide，PI)凋亡试剂盒购于生工生物工程(上海)股份有限公司；BD FACS Calibur 流式细胞仪购于美国BD公司。……