黄政，涂荣会，钟国强，方存明，马小林，胡学俊

(1.宣城市人民医院 心血管内科，宣城 242000；2.广西医科大学第一附属医院 心内科，南宁 530022)

缺氧后适应(hypoxic postconditioning，HPC)是减轻心肌缺血-再灌注损伤的有效方法，其机制可能与抑制免疫炎症反应有关[1]。近年来的研究发现，TLR4/NF-κB信号通路在缺血-再灌注后的心肌免疫炎性损伤中发挥重要作用[2]，积极干预TLR4/NF-κB信号通路可能是减轻心肌缺血-再灌注损伤的新靶点。热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)对损伤的心肌细胞具有免疫调节作用，表现为细胞内HSP70能够与NF-κB结合，抑制NF-κB下游炎性蛋白基因的转录。另外，细胞内HSP70也可对TLR4介导的炎症反应发挥负调节作用。缺血预适应以及某些药物可通过上调HSP70表达减轻心肌缺血-再灌注损伤[3-4]。HPC的心肌保护作用是否与TLR4/NF-κB信号通路以及HSP70表达有关，目前鲜见报道。本研究通过建立心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤模型，实施HPC，体外模拟心肌HPC，从细胞水平探讨HPC对HSP70、TLR4/NF-κB信号通路以及心肌细胞免疫炎性损伤的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料H9C2心肌细胞系购自中国科学院上海细胞库。DMEM培养液、FBS购自Gibco公司，槲皮素(quercetin，Quer)购自北京索莱宝科技公司，大鼠HSP70、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2，Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)、Caspase-3、β-actin抗体购自北京博奥森生物科技有限公司，Hoechst 33242染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物技术公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞处理及分组 用含10%FBS的DMEM高糖培养液培养H9C2心肌细胞，置于37 ℃、5% CO2、95%空气的培养箱中；细胞缺氧培养时更换为DMEM无糖培养液，置于含5% CO2、95% N2混合气体的厌氧罐中；……