叶蓓，成宇，司玉莹，陆柳，宗明，范列英

(同济大学附属东方医院 检验科，上海 200120)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis， RA)是一种慢性自身免疫性疾病，其病理机制主要是成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte，FLS)和巨噬细胞异常增多，导致滑膜组织增生、血管翳形成以及软骨和软骨下骨侵袭性破坏[1]。破骨细胞是引起骨侵蚀的主要细胞。多种促炎因子如巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor，M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)等均能诱导巨噬细胞向破骨细胞分化[2-3]。抗环瓜氨酸肽抗体是诊断RA的特异性血清标志物，其分子靶点是瓜氨酸蛋白[4]。在Ca2+存在下，肽酰基精氨酸脱亚胺酶(peptidyl arginine deiminase，PADI)可将肽基精氨酸转化为瓜氨酸，即蛋白质瓜氨酸化。本课题组前期研究发现，PADI4在RA患者外周血单核细胞和滑膜组织中显著高表达，且能抑制FLS凋亡，促进其增殖、活化，从而参与RA的发生与发展[5-6]。然而，PADI4在RA巨噬细胞中的作用及调控机制尚不清楚。本研究拟通过分析低氧环境下巨噬细胞中PADI4的表达情况及其对破骨细胞分化和功能的影响，进一步探讨PADI4在RA发病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 细胞来源 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7购于中国科学院上海细胞库。

1.2 方法

1.2.1 RAW264.7细胞培养 RAW264.7细胞用含10%FBS、1%青链霉素双抗的DMEM高糖培养液培养，培养条件为5% CO2、21%O2、37 ℃常氧培养和5% CO2、3%O2、37 ℃低氧培养。

1.2.2 体外诱导破骨细胞 将RAW264.7细胞以3×104个/孔的密度接种于24孔板，加入含有50 ng/mL M-CSF和50 ng/mL RANKL的完全DMEM高糖培养液孵育7 d，每3 d换液1次。

1.2.3 RAW264.7细胞中PADI4表达的抑制 在诱导破骨细胞前将RAW264.7细胞接种于24孔板稳定24 h。分别设立常……