张 蕾，黄华明，周 杰，聂 超*

（1.江苏卫生健康职业学院，江苏 南京211800； 2.无锡市锡山人民医院，江苏 无锡 214015）

宫颈癌是一种严重危害女性健康的常见恶性肿瘤，每年世界新增患者达几十万人。尽管宫颈癌疫苗的使用和筛查手段不断更新，患病率已经降低［1］，但化疗对术前缩小病灶增加手术机会、术后防止复发转移及晚期转移性宫颈癌仍起着不可替代的作用［2］。由于化疗药物缺乏理想疗效、不良反应较强等问题［3］，中药替代或与现有药物联合使用正成为当前新的趋势。

原花青素（proanthocyanidins，PC）是一种黄酮类化合物，广泛存在于各种植物的核、皮、种籽等部位，在葡萄籽中含量最高，也是多种中药的主要成分之一［4］，有着抗炎、降血压、抗白血病、抗动脉粥样硬化、抗氧化等功效［5⁃6］，同时其来源广泛，不良反应低，受到了人们广泛关注。本实验将原花青素作用于宫颈癌HeLa 细胞，观察药物对细胞侵袭和迁移的影响，并讨论药物抑制上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）产生作用的机制，以期为该成分开发利用提供参考。

1 材料

1.1 细胞株 人宫颈癌HeLa 细胞购于江苏凯基生物技术股份有限公司（KG042），置于完全培养基（90%DMEM ＋10% CS）中，在37 ℃、5% CO2饱和湿度的培养箱中培养。

1.2 试剂与药物 原花青素（南京泽朗生物科技有限公 司，ZL20170515012，纯度＞ 98%）。SB431542（美国Sigma 公司，616464）；TRIzol（美国Invitrogen 公司，15596026）；氯仿（865⁃49⁃6）、异丙醇（67⁃63⁃0）（上海贤鼎生物科技有限公司）；MTT（北京索莱宝科技有限公司，IM0280）；Transwell 小室（美国Chemicon 公司，ECM550）；PBS（含EDTA）（KGY0012）、全蛋白抽提试剂盒（KGP250）、5×SDS⁃PAGE 蛋白上样缓冲液（KGP101）、SDS⁃PAGE 凝胶配制试剂盒（KGP113）、Western⁃blot一抗TGFβ1（KGYT4632⁃6）、E⁃cadherin（KGYT1453⁃6）、Smad2（KG21323⁃2）、Smad3（KG21325⁃2）、pSmad2（KG11322）、pSmad3（KG11325⁃2）、内参一抗GAPDH（KGAA002－1）、二抗（KGP1201）、ECL检测试剂盒（KGP1121）（江苏凯基生物技术股份有限公司）；……