支文兰 常君丽 胡少朴 王晓波 赵福来 孙星媛 马小平 杨燕萍

骨肉瘤是儿童和青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤，主要起源于长骨干骺端，具有恶性度高、早期易转移和死亡率高等特点［1］。新辅助化疗联合保肢术治疗可使无转移骨肉瘤患者5年生存率达70%［2］，但肺转移患者的5年生存率仍不足30%［3］。然而，20%的骨肉瘤患者确诊时已存在肺转移，且90%有微转移灶［4-5］，因此即使手术也仍有80%的患者发生复发转移［6］。由此可见，探索骨肉瘤发生肺转移的机制，从而有效控制肺转移是提高骨肉瘤患者生存率的关键［7］。本研究以人源骨肉瘤143B细胞为亲本细胞，采用GFP和荧光素酶标记143B细胞后注射到4周龄BALB/c裸鼠胫骨内，建立胫骨内原位注射肺转移瘤模型，同时建立了一株具有高度肺转移能力的骨肉瘤细胞亚系143B-HLM，为后续探索骨肉瘤肺转移发生机制提供了实验基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

MEM细胞培养基、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶、青霉素-链霉素购自美国Gibco公司；二甲基亚砜（DMSO）、新霉素（G418）购自美国Sigma公司；磷酸盐缓冲液（PBS）购自瑞典Medicago公司；RIPA裂解液、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒、HRP-标记山羊抗兔IgG、HRP-标记山羊抗鼠IgG购自碧云天公司；波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）、β-actin抗体购自英国Abcam公司；荧光显微镜购自日本Olympus公司；pENTER-EGFP质粒、plv-lu-ciferase荧光素酶质粒购自美国Genomeditech公司；小动物生物发光活体成像系统购自美国Perkin Elmer公司；xCELLigenceRTCADP实时细胞分析仪购自德国Roche公司；称重仪、游标卡尺购自上海精密科学仪器有限公司。

1.2 细胞系来源与培……

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