聂婷婷，杨 帆，韩 瑜，于江虹，刘玲玲，焦立新

(吉林省血液中心，吉林 长春130033)

在Rh血型系统抗原中，发现D抗原免疫原性最强[1]。RhD抗原不合的输血或妊娠等可以产生Rh抗体并导致溶血性输血反应和新生儿溶血病[2-3]。根据红细胞膜上RhD抗原的数量不同以及抗原结构发生变化使RhD抗原有多种变异型，包括弱D(Weak D)、部分D(Partial D)及D放散型(Del)。由于RhD变异型血清学表达的差异不明显，在血清学中难以准确区分，一般需要结合分子生物学方法进行RHD基因鉴别[4-5]。本研究应用荧光PCR方法与血清学共同检测，避免可能出现的误判。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2020年7月-2020年12月期间在本血液中心献血的志愿者，采用单克隆抗体IgM-D试剂经PK7300全自动血型分析仪初筛为RhD阴性血液样本共221例。

1.2 仪器与试剂

全自动血型分析仪(贝克曼PK7300，美国)；荧光定量PCR仪(ABI 7500，美国)；人类红细胞RHD基因分型检测试剂盒(江苏伟禾生物科技有限公司)；样本释放剂试剂盒(广州展全生物科技有限公司)；微柱凝胶抗人球卡(珠海贝索生物技术有限公司)；单克隆抗体IgG抗-D试剂、单克隆抗体IgM抗-D试剂、抗人球蛋白试剂(上海血液生物医药有限责任公司)。

1.3 方法

1.3.1RhD阴性的血型血清学确认 采用间接抗人球蛋白试验(IAT)进行RhD阴性确认并鉴定弱D型[6]。

1.3.2Del型的血型血清学检测 上述实验RhD阴性样本继续进行吸收放散实验。实验中设置阴、阳性对照，采用0.9%生理盐水洗涤红细胞3次，以2 500 r/min离心2 min，取200 μl待检压积红细胞与200 μl的IgG抗-D单克隆抗体在37℃水浴箱中，温育1 h，期间每隔20 min摇晃一次。0.9%生理盐水洗涤红细胞6次，留取末次上清作为对照。……