谭放，冯拓宇，杨娇英

（湛江市妇幼保健计划生育服务中心，广东 湛江 524000）

0 引言

三体型和单体型最为常见染色体非整倍体异常情况。最常见的疾病有21三体综合征、Turner综合征（45，X）、18三体综合征和Klinefelter综合征（47，XXY）[1]。对于这种疾病，临床检测金标准是传统羊水细胞培养染色体核型分析技术，可以发现染色体数目、结构是否存在异常，但羊水培养周期较长，且操作要求严格孕妇，一旦失败，就需要二次穿刺，在孕妇中接受度较低[2]。定量荧光PCR技术（QF-PCR）通过对染色体上多态性短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点进行扩增，经过高分辨率胶电泳（如毛细管电泳等）对产物进行分离，是第二代遗传标记方法，其特点是检测简便、快捷[3]。目前医学对于染色体病还没有有效的治疗方法，因此在产前进行诊断筛查意义重大。本次研究将探讨QF-PCR的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料。经我院伦理委员会批准，选取2020年7~12月在湛江市妇幼保健计划生育服务中心产前诊断中心就诊的高危孕妇289例，风险指标主要包括高龄、唐筛高风险、超声发现胎儿超声软指标异常及夫妇双方同型地中海贫血。所有孕妇均已被告知检测风险且已签订知情同意书，均无羊水穿刺相关禁忌证。受检孕妇年龄17~46岁，平均（32.51±2.09）岁，孕周16~27周，平均（19.21±2.63）周。

1.2 方法

1.2.1 对289例孕妇进行介入性穿刺，抽取20~25 mL羊水，分成15 mL和8 mL分别保存在两支无菌离心管。

1.2.2 染色体核型分析：将装有15 mL羊水的无菌离心管送至细胞遗传室，进行常规细胞培养及制片G显带，核型分析参照ISCN（2016）标准。

1.2.3 QF-PCR：根据提取剂盒说明书提取羊水细胞DNA，所提DNA均用Qubit4.0检测DNA浓度以备用。检测试剂盒由达瑞公司提供。部分怀疑母源污染的标本，抽取2 mL母血检测其STR位点加以排除。对每个标本分A（21染色体）、B（18/13染色体）、C（X/Y染色体）三个体系进行扩增；每份检测取1μl PCR产物和13.5μL甲酰胺、0.5μl GeneScanTM600 LIZ® Size standard v2.0（内标）混合，95℃变性5分钟，放冰上至少1 min，将混合物置ABI3500Dx基因分析仪进行上样操作，用GeneMapper软件进行数据收集和分析。

1.2.4 QF-PCR染色体非整倍体判断 根据临床生化协会/临床分子遗传协会（ACC/CMGS）规定判断标准如下：STR位点上等位基因扩增后显示为3个荧光峰，峰值面积比接近于1∶1∶1，可直接判断为三体型。

若只显示两个峰，则计算两个峰的峰面积比值，凡双峰面积比值>1.8或者<0.65则可判定为三体。

正常双峰面积比值区间为0.8-1.4，介于两个区间之间的值无法判断，需重新检测。

每个染色体至少2个 STR 位点能提供信息且为异常峰型，才能诊断此样本为相应染色体异常。

45，X诊断标准：所有的 X 染色体STR呈单峰[4]。

检测所用STR位点、位置如下：

13号染色体标记及位置：D13S305（13q13.3）、D13S628（13q31.3）、D13S634（13q21.32）、D13S742（13q12.12）。

18号染色体标记及位置：D18S1002（18q11.2）、D18S386（18q22.1）、D18S391（18p11.31）、D18S535（18q12.3）。

21号染色体标记及位置：21q11.2（21q11.2）、D21S1411（21q22.3）、D21S1412（21q22.2）、D21S1414（21q21.1）、D21S1433（21q21.1）。

XY特异性标记及位置：DXS1187（Xq26.2）、DXS6809（Xq21.33）、DXS8377（Xq28）、DXS981（Xq13.1）、AMXY（Xp22.2/Yp11.2）。

2 结果

2.1 染色体核型分析结果。289例标本中，检出正常核型258例，21、18、13、X、Y染色体非整倍体31例。

2.2 QF-PCR结果。正常（46，XX或46，XY）有256例，异常有30例，分别为21三体15例、18三体5例、13三体1例，性染色体非整倍体6例（X0 2例，XXX 1例，XXX或XX/X0嵌合体1例，XXY1例，XYY1例），3例标本存在母源污染。

2.3 两种方法检测结果一致性为96.77%（30/31），异常检测结果一致性100%，详见表1。

表1 染色体核型分析与QF-PCR检测结果比较

3 讨论

染色体非整倍体是出生缺陷中的主要原因之一，最常见有唐氏综合征，给家庭造成巨大的精神和经济压力，对社会也是一种负担。因此针对高风险孕妇在孕期做相关检查对预防染色体非整倍体是很有意义的。但是产前筛查结果为阳性不代表相关疾病的发生，而是提示患病风险存在，且比正常阴性结果发生概率高。而结果提示阴性也不完全排除疾病的发展，仅代表发生风险低[5]。

核型是指染色体组在有丝分裂中期的表型（数目、大小、形态特征等），对此进行分析对于探讨人类遗传病的机制、物种亲缘关系与进化、远缘杂种的鉴定均有重要意义[6]。染色体核型能发现染色体结构及数目异常，是染色体病检测的金标准[7]。经染色体核型分析，本研究的289例羊水标本中检出21、18、13、X、Y染色体非整倍体31例，正常核型258例。本研究应用QF-PCR技术，通过对染色体上STR位点进行扩增，结果显示，正常（46，XX或46，XY）256例，异常30例（21三体15例、18三体5例、13三体1例），性染色体非整倍体6例（X0 2例，XXX 1例，XXX或XX/X0嵌合体1例，XXY1例，XYY1例），3例存在母源污染。QF-PCR在临床上广泛用于染色体非整倍体检测，不仅有高度灵敏性，而且具有高准确性和高特异性，在染色体非整倍体中具有较高的诊断率[8]。本研究将QF-PCR检测结果与染色体核型分析检测结果进行对比，检测结果一致性为96.77%，其中异常检测结果一致性为100%，结果证实QF-PCR应用于染色体非整倍体的诊断中有较高的准确性。

综上所述，在产前诊断中，QF-PCR技术可准确快速检出染色体非整倍体情况，虽只是一种筛查技术，但在实际应用中可作为染色体核型分析的有效补充，在快速产前诊断中具有重要价值。