周林 李瀚 赵阳 汪京 贾亚男 张欣雪 李先亮 郎韧 贺强

调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）是一种具有负向免疫调节功能的细胞亚群，在移植术后免疫耐受的形成过程中发挥重要作用[1-2]。目前，大多数关于Treg的研究主要集中在经典的CD4+CD25+Treg亚群，但越来越多的证据表明CD8+Treg在维持机体免疫平衡以及诱导免疫耐受方面也扮演关键的角色[3-4]。首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科团队通过长期研究，证实CD8+CD45RClowTreg是促使肝移植免疫耐受发生的关键细胞亚群[5-8]。在研究过程中我们发现以CD45RC为分类标准的CD4+T细胞的亚群即CD4+T细胞受体（T cell receptor，TCR）αβ+CD45RClowT细胞（CD4+CD45RClowTreg）在不同肝移植模型中表达差异显著，且与Treg、浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）的表达具有相关性。关于CD4+CD45RClowTreg研究早在20世纪90年代就开始，但是研究一直处于落后状态，且多数研究集中于心脏移植与肾移植[9-11]，关于肝移植方面的报道较少[12]。因而，本文旨在通过对肝移植免疫耐受与急性排斥反应（acute rejection，AR）大鼠中不同免疫细胞亚群的变化进行分析，结合组织病理学检测，探讨CD4+CD45RClowTreg作为免疫调节细胞的潜能及其在免疫耐受发生中的作用，为丰富Treg亚群网络奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级Brown Norway（BN）大鼠与Lewis大鼠各15只，体质量200～220 g，均购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证：SCXK-（京）2016-0006。

1.2 实验试剂

荧光素标记的单克隆抗体异硫氰酸苯酯（phenylisothiocyanate，PITC）/brilliant violet（BV）-421-CD3、别藻蓝蛋白（allophycocyanin，APC）-CD4、异硫氰酸荧光素（ fluorescein isothiocyanate，FITC）/藻红蛋白（phycoerythrin，PE）-CD8、多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物（peridinin-chlorophyll-protein complex，PerCP）-TCR-αβ、PE-CD45RC、PE-CD103、APC-主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC） Ⅱ及同型对照抗体购自美国BD公司，Lysing buffer 购……