小檗碱对大鼠压力超负荷肥厚心肌组织miR-21-3p表达的影响及其干预心肌肥厚的作用机制
2021-09-23刘盛祥黄宇鹏杨国康金红艳
刘盛祥,黄宇鹏,杨国康,金红艳
心肌肥厚是心肌细胞为克服增高的压力负荷,保证心脏充足射血量的一种代偿性反应,长期、严重的心肌肥厚引起心肌结构及功能的失代偿,最终导致心律失常、心力衰竭及猝死等不良心血管事件的发生[1]。小檗碱是一种从植物中提取的异喹啉类生物碱,具有一定的抗心肌肥厚作用,但其在心肌肥厚中的具体分子机制尚不明确[2]。微小RNA(micro RNA,miRNA)是内源性小分子非编码RNA,大量研究证实,miRNA在心肌肥厚中发挥着关键作用[3-4]。本研究为证实小檗碱在抗心肌肥厚中的作用是否与miRNA相关,构建压力负荷诱导下的大鼠心肌肥厚模型,探讨小檗碱对心肌肥厚的影响及其可能机制,报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)实验动物:SPF级健康雄性SD大鼠36只,8~10周龄,体质量160~200 g,由武汉科技大学实验动物中心提供,动物许可证为SYXK(新)2016-003、合格证为SCXK(新)2016-0002。(2)药物及试剂:盐酸小檗碱(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),一抗AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β及内参GAPDH(北京科海瑞嘉生物科技有限公司),BCA蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量试剂盒(赛默飞世尔科技有限公司)。(3)仪器设备:飞利浦HD11 XE超声诊断仪(德国Philips公司)、移液枪(德国Eppendorf公司)、实时荧光定量PCR仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)、凝胶成像仪(美国Protein Simple公司)。
1.2 实验方法 2019年6月—2020年9月于武汉科技大学实验动物中心进行实验。心肌肥厚模型的构建:SPF级雄性SD大鼠36只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组及小檗碱组,每组12只。模型制备方法参照文献[5],大鼠腹腔注射2.5%戊巴比妥麻醉,分离肌肉及组织,游离腹主动脉,模型组大鼠挂线结扎腹主动脉,超声多普勒检测腹主动脉达到70%狭窄视为造模成功;……
