张玮，李华南，赵娜，骆雄飞，刘斯文，陈英英，包安，王海腾，海兴华，王金贵

（天津中医药大学第一附属医院推拿科，天津 300193）

肠道黏膜通透性在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发病中起到关键作用，且通透性的高低与NAFLD的严重程度密切相关。目前，已有众多研究证实[1-3]，以改善肠道黏膜通透性为干预靶点的治疗方法均可逆转和预防NAFLD的进一步发展。腹部推拿治疗NAFLD的临床疗效已被证实，但其机制研究尚处于探索阶段，相关研究甚少。最新研究证实，肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、肌球蛋白轻链磷酸化（P-MLC）及多聚体的纤维状肌动蛋白（F-actin）的含量及相互作用与调控肠道黏膜通透性密切相关。因此，项目组以MLCK、P-MLC和F-actin为切入点，探索腹部推拿治疗NAFLD的作用机制。

1 材料

1.1 动物 SPF级的健康成年SD大鼠30只，2～3 月龄，体质量（200±20）g，雌雄不限，适应性饲养1周。实验动物由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。实验动物合格证：SCXK（京）2014-0004。

1.2 主要试剂与设备 F-actin Antibody（美国Proteintech公司），DAPI（鼎国，北京），PDAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），Western LightningChemiluminescenceReagent（美国PerkinElmer公司），Super RX感光胶片（日本FUJIFILM公司），LabWorksTM凝胶成像及分析系统（美国UVP公司），VE-386型转移电泳槽（北京原平皓生物技术有限公司），倒置显微镜（日本OLYMPUS公司），荧光显微镜（日本SONY公司）

2 方法

2.1 造模方法 将SD大鼠进行适应性饲养，1周后参考文献造模方法[4]进行大鼠的NAFLD模型复制。利用高脂饲料，每日对SD大鼠进行灌胃处理，饲料喂养的标准为10 mL/kg。正常对照组则进行蒸馏水灌胃处理。6周后，随机选择3只SD大鼠，其中1只为正常大鼠，2只为造模大鼠，处死后取出肝脏，并进行肝组织的苏木精-伊红（HE）染色，以判断造模是否成功。……