李晓民 梁韦巍 韩 冬 刘爱芹 韩志强

1山东省潍坊市皮肤病防治所，潍坊，261061；2山东省潍坊市安丘市妇幼保健医院，潍坊，262100

皮肤鳞状细胞癌是一种好发于颜面部常见的非黑素性恶性肿瘤[1]，大约5%的患者发生淋巴结转移，严重威胁患者的生命健康[2]。目前皮肤鳞状细胞癌治疗仍以手术、放疗为主，对于不宜手术、复发或淋巴结转移的患者采取化学治疗[3]。化疗药有诸多严重不良反应，开发新型高效化合物用于皮肤癌治疗具有重要意义。

葡萄籽原花青素(grapeseedproanthocyanidin，GSP)具有抗氧化[4]、心血管保护[5]、抗肿瘤[6]等多种生物活性和药理作用，用于化妆品中可使皮肤老化减慢[7]。研究发现Akt/GSK-3β信号通路与鳞癌细胞的增殖迁移等生物学过程有关[8，9]，然而关于葡萄籽原花青素是否通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖的研究甚少。因而，本研究旨在观察GSP对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响，及GSP对PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞购自中国科学院细胞库。DMEM培养液购自美国Hylcone公司；胎牛血清购自杭州四季青公司。葡萄籽原花青素(纯度≥90%)、Hoechst33258购自美国Sigma公司。兔抗p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-GSK-3β及GSK-3β抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠抗GAPDH抗体购自上海康成生物工程有限公司。抗兔IRdye700及抗鼠IRdye800荧光二抗购自美国LI-COR公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 A431细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下的CO2孵箱中进行培养。细胞融合到90%左右进行传代培养。

1.2.2 MTT检测细胞活力取对数生长期的A431细胞接种于96孔板，每孔1×104个细胞，培养24 h后，加入不同浓度的葡萄籽原花青素(5、10、20、40、80 μg/mL)和顺铂(Cis，3 μM)处理24、48、72h。……