毛春梅 ，高秋爽 ，肖水清 ，张玉杰

（1.新沂市人民医院，江苏 新沂 221400；2.山东医学高等专科学校，山东 济南 250002；3.济南市口腔医院，山东济南 250001）

0 引言

牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周疾病的主要致病菌，能产生大量的毒力因子，破坏牙周组织。致病岛的发现让人们对细菌有了不同的认识。rag基因被确定为牙龈卟啉单胞菌的致病岛基因之一。rag基因在临床菌株中有4种不同的基因型，不同基因型的致病能力也不同[1-2]。本研究利用多重PCR技术检测青少年牙龈炎患者龈沟液中的牙龈卟啉单胞菌致病岛rag基因的不同基因型，分析不同基因型致病岛基因在疾病发生中所起的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择济南市口腔医院牙周科就诊的青少年牙龈炎初诊患者89例组成牙龈炎组，年龄12～16岁，平均年龄14.3岁；选择42例牙周健康者组成对照组，年龄12-16岁，平均14.6岁；均为山东地区常住居民。要求患者无系统性疾病，半年内未接受过系统的牙周治疗，而且未服用引起牙龈增生的药物和抗生素，且知情同意。

1.2 实验方法

1.2.1 采集标本

采用无菌纸尖法采集患者龈沟液。

1.2.2 龈沟液及标准菌株DNA提取

标准菌株DNA采用DNA提取试剂盒提取。龈沟液DNA采用加热裂解法提取。

1.2.3 牙龈卟啉单胞菌和rag基因型引物的设计及合成[1,3]（表1）。

表1 P.gingivalis 16S rDNA和4种rag基因型的引物序列

1.2.4 PCR检测

以16S rDNA为引物进行PCR扩增，确定牙龈卟啉单胞菌阳性患者；以牙龈卟啉单胞菌阳性患者DNA为模板进行多重PCR扩增，确定rag基因阳性患者。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件，用χ2检验比较组间检出率的差异：P＜0.05具有统计学意义。……