李瑾 李聪

黄曲霉毒素是寄生曲霉、模式曲酶以及黄曲霉在一定温度条件下形成的真菌毒素，其对人体有较强的致癌性、致病性，同时也是严重的真菌毒素，B1、B2、G1、G2是污染粮食的重要黄曲霉毒素成分。根据我国有关规定，玉米、玉米面和玉米制品中，AFB1含量最高为20ug/kg。当前，对于黄曲霉毒素的检测方法包括薄层色谱法、酶联免疫法、胶体金试纸条法、液相色谱法、液质联用法等，但这些方法都各有优缺点。本研究结合免疫亲和净化，能够基于高效液相色谱分离技术，构建微进量小、分离度较高、无需衍生的快速黄曲霉毒素定量、定性分析法。

一、材料与方法

1.仪器与材料。高效液相色谱仪，日本岛津生产的NexeraUHPLC L-3a荧光检测器；黄曲霉毒素免疫亲和柱；玻璃纤维滤纸；0.22um有机滤膜；6位泵流操作架；电子分析天平；氮吹仪；超纯水机；黄曲霉毒素样品标准品；色谱纯级别的甲醇溶液。

2.设置分析条件。本研究采用的色谱柱为C18柱。流动相为45：55，甲醇水溶液流速设置为每分钟0.2mL，进样量为2uL，柱温设置为30℃，激发波长和发射波长分别为360nm和440nm。

3.样品制备。首先，配置标准溶液。将黄曲霉毒素混标分别配置为B1浓度：2.0、10.0、5.0、20.0、50.0ng/mL，B2和G2的浓度为：0.48、1.20、2.40、4.80、12.00ng/mL，G1的浓度为：1.12、2.80、5.6、11.2、28ng/mL。

二、研究结果

下图为黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的保留时间，其分别为4.003分钟、3.176分钟、2.533分鐘、2.052分钟，所有峰走完后全程需5分钟。

按照液相色谱法流动相中甲醇和水的比例为45：55、流速为0.8-1mL/min、出峰时间为15分钟，检测一个样品需消耗色谱级甲醇5.4-6.75mL。而采用高效液相色谱进行检测时，甲醇使用体积为0.45mL，相比国标方法可缩短检测时间，减少有机溶剂的使用。……