史雪丽，陈婷，苏胜，张丽娟

葡萄膜黑色素瘤多发于40～60 岁，是成人最常见的眼内原发恶性肿瘤。葡萄膜黑色素瘤起源于葡萄膜黑色素细胞，85%发生在脉络膜，多单侧发病，恶性度较高[1-2]。手术可以有效清除病灶，但是，对于癌细胞转移、复发或失去手术时机的晚期肿瘤患者，生物治疗可以有效控制肿瘤扩散，因此，寻找一种疗效好、副作用小、安全性高的治疗药物迫在眉睫。马钱子碱（brucine）为中药马钱子的主要生物碱单体，具有抑制免疫、杀菌消毒、抗炎镇痛、抗肿瘤等药理作用[3-4]。本研究拟在细胞水平进一步研究马钱子碱对葡萄膜黑色素瘤细胞的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和药物

人眼葡萄膜黑色素瘤细胞UM90（美国ATCC公司），马钱子碱（美国Sigma 公司），二甲基亚砜、胎牛血清（杭州四季青公司），CCK-8 细胞增殖检测试剂盒（南京建成生物研究所），苏木精-伊红（hematoxylin-Eosin staining，HE）染色液（北京索莱宝科技有限公司），Hoechst 33258 染色试剂盒（北京普利莱基因技术有限公司），Annexin-V/PI 试剂盒（美国BD公司），BCA 蛋白测定试剂盒（上海碧云天生物科技公司），PVDF 膜及化学发光试剂（南京建成生物研究所），Bax 及Bcl-2 抗体（北京中杉金桥公司）。

1.2 细胞培养

黑色素瘤细胞接种于含10%胎牛血清的1 640培养基（链霉素100 μg/mL、青霉素100 U/mL）中，培养箱CO2体积分数为5%，温度为37℃，每3 d 更换一次新鲜培养液。

1.3 黑色素瘤细胞分组

共分成4 组。（1）对照组（CG）：以正常培养液培养24 h。（2）马钱子碱组：依马钱子碱浓度不同分为3 个亚组。马钱子碱低浓度组（brucine low concentration group，BLG），马钱子碱中浓度组（brucine medium concentration group，BMG），马钱子碱高浓度组（brucine high concentration group，BHG）即在培养基中依次加入25、50、100 μg/mL 的马钱子培养液。……