李建卫 李焕焕 杨 勇 张 培 黄玉梅

1 滨州医学院附属医院口腔颌面外科 山东 滨州 256603；2 滨州医学院附属医院眼科 山东 滨州 256603；3 滨州医学院附属医院口腔修复科 山东 滨州 256603

脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs)不仅具有多向分化潜能，同时因其具有取材方便，来源广泛和易于培养等优点成为了越来越多研究者的选择对象[1-3]。前期有研究发现应力刺激能够促进ADSCs的骨向分化[4]，但是力学作用下ADSCs骨向分化的分子机制还不清楚。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类碱基长度约为22 bp的内源性非编码蛋白小分子RNA，通过识别mRNA的3′-非翻译区抑制其翻译而参与调控一系列的生命活动[5-6]。研究发现并证实了多个miRNA在间充质干细胞成骨分化过程中的调控作用[7-9]。目前关于机械应力加载下ADSCs骨向分化过程中相关miRNA表达模式的研究较少。本研究采用四点弯曲细胞加力装置对细胞施加单一周期的张力刺激诱导骨向分化，筛选力学作用下成骨分化相关的miRNA，并探讨其在力学刺激不同时间点的表达模式，为进一步研究应力下成骨相关miRNA的功能及力学信号转导机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂仪器 C57BL/6小鼠由滨州医学院实验动物中心提供。Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)，胎牛血清(Gibco公司，美国)，成骨诱导培养基、成脂诱导培养基(Cyagen 公司，美国)，总RNA提取Trizol试剂、α-MEM培养基(HyClone公司，美国)，反转录试剂盒PrimeScript RT reagent kit、PCR反应试剂盒SYBR Premix Ex TaqⅡ(TaKaRa公司，大连)，miRNA标记试剂盒miRCURYTMPower labeling kit、miRNA芯片miRCURYTMLNA Array(Exiqon公司，丹麦)，紫外分光光度计(Nanodrop公司，美国)，GenePix 4000B芯片扫描仪、GenePix Pro 6.0图像分析软件(Axon Instruments公司，美国)。成……