汤电 郑江涛 李奇润 谭涛

摘  要：本试验对比了两种仔猪球虫的检测方法，即使用饱和盐水漂浮法和尿素溶液漂浮法检测仔猪球虫卵囊。结果显示，与饱和盐水漂浮法相比，尿素溶液漂浮法能使粪便样品含的杂质更少，显微镜下的视野更清晰，用时更短，阳性检出率更高，因此尿素溶液漂浮法更适合规模化猪场检测仔猪球虫。

关键词：仔猪球虫;尿素溶液漂浮法;饱和盐水漂浮法

中图分类号：S858.28         文献标志码：C        文章编号：1001-0769（2021）04-0130-03

1  材料与方法

1.1 材料

1.1.1 所需材料

食盐，尿素，生理盐水，一次性乳胶手套，一次性水杯，记号笔，研钵，医用纱布，50 mL烧杯（或输精瓶）若干，胶头滴管（或移液器带吸头），载玻片，盖玻片，光学显微镜。

1.1.2 溶液制备

⑴饱和盐水溶液的配制：每升水（加热）中加入380 g食盐，充分搅拌直至完全溶解，做好标记备用。

⑵尿素溶液的配制：每升水（加热）中加入1 000 g尿素，充分搅拌直至完全溶解，做好标记备用。

1.1.3 粪便样品采集

2021年3月，湖南省娄底市某规模化猪场的仔猪感染等孢球虫。选取7～21日龄仔猪所在产床，收集不同物理性状的新鲜粪便，装入一次性水杯中，将从每窝或每个产床采集的粪便装入同一个杯子中，作为1份样品供检测，每份样品收集3 g～5 g，记录仔猪日龄和对应母猪的耳号，共采集样品30份。

1.2 方法

⑴研磨：将粪便样品倒入研钵中，均匀研磨成糊状，使粪便中的球虫卵充分释放出来。

⑵分组：将研磨后的粪便样品一分为二，分别用两种溶液搅拌溶解。

⑶过滤：将医用纱布叠成4～6层，用于过滤研磨后的粪便样品，球虫卵囊可穿过纱布进入滤液，随后弃残渣，取滤液。

⑷漂浮：将滤液摇匀，倒入烧杯（或输精瓶）中，加入相应的溶液，确保烧杯（或输精瓶）中的溶液满而不溢。加入饱和盐水溶液的烧杯（或输精瓶）静置30 min，加入尿素溶液的烧杯（或输精瓶）静置10 min。

⑸制片：用胶头滴管（或移液器）分别从烧杯（或输精瓶）所盛溶液液面的不同点吸取少量（约20 μL）液体，并将液体滴在载玻片上，盖上盖玻片，做好标记待检，注意在盖盖玻片时不要产生气泡。

⑹镜检：用光学显微镜观察载玻片，在10×10倍的视野中，可在阳性粪便样品中找到绿豆般大小的圆形或椭圆形疑似球虫卵囊。随后切换至10×40倍视野，逐个观察，拍照记录。

2  结果与结论

2.1 镜检结果

（1）镜下视野：在显微镜视野中，饱和盐水溶液组的粪便样品滤液含有较多的蛋白、气泡等杂质，严重干扰球虫卵囊的观察，甚至存在卵囊被杂质掩盖而未被发现的情况 （图1）;而尿素溶液组的粪便样品滤液含杂质较少，镜下视野清晰，便于观察球虫卵囊（图2）。

⑵检出率：在30份样品中，饱和盐水溶液组检出5份有球虫卵囊（阳性样品），尿素溶液组检出9份有球虫卵囊（阳性样品），尿素溶液组的阳性检出率高于饱和盐水溶液组的。

2.2 小结

在两种常用检测方法中，尿素溶液漂浮法所需的静置时间短，样品滤液在显微镜下视野清晰、杂质少，检测耗时短，综合而言优于饱和盐水漂浮法。

3  讨论

按要求采样是关系能否准确检测的前提。在生产一线，常常会遇到采样人员误以为只需采集腹泻粪便样品的情况。由于仔猪腹泻症状和粪便排卵的相关性不明显[1]，正确的采样方法是要尽可能涵盖产床上各种不同物理性状（干燥、糊状、水样、不同颜色）的粪便（图3），每窝或每个产床采集3～5个点，每个粪便点采集1 g～2 g，随后汇合于同一个容器中，作为一个样品。采集的粪便限于7～21日龄仔猪的。

在对粪便样品进行处理的过程中，过滤时为了减少球虫卵囊漂浮而最后留在纱布上，需要边过滤边搅动纱布上的固液混合物。滤液漏干后，再用溶液冲洗固体残渣，同时过滤一次。

由于哺乳仔猪的消化系统发育不完全，不能完全吸收肠道中的脂肪、蛋白质等营养物质，再加上机体的抵抗力弱，消化道很容易受到损伤，导致未消化的脂肪、蛋白质等随粪便一起排出。在处理粪便样品的过程中，饱和盐水使蛋白质发生盐析，球虫卵囊在溶液中与蛋白质和其他有机物杂质一起上浮，导致卵囊的上浮速度减慢，因此在对饱和盐水处理组的样品滤液进行镜检前需要静置至少30 min，才易于在液面收集到卵囊。盐析的蛋白质悬浮在盐水溶液中不易沉降，脂肪也漂浮于液面，肉眼可见明显的分层现象（图4）。液面取样导致显微镜下的视野中杂质很多。

尿素能使粪便中的蛋白质变性凝聚而沉淀，凝聚后的蛋白質不易漂浮，静置时粪便样品滤液的分层现象不明显（图4）。尿素溶液处理组粪便样品的滤液不仅所需的静置漂浮时间比盐水处理组的短，而且进行镜检时样品滤液中的杂质少，视野清晰。由于有效地排除了有机物杂质的干扰，尿素溶液漂浮法的阳性检出率更高。据2013年金丽珠等[2]报道，该方法的阳性检出率比饱和盐水漂浮法的高出30%～60%。

综上所述，在现场对仔猪的粪便进行等孢球虫检测时，尿素溶液漂浮法明显优于饱和盐水漂浮法。

参考文献

[1] ANJA JOACHIM， B?RBEL RUTTKOWSKI，DANIEL SPERLING. Detection of Cystoisospora suis in faeces of suckling piglets-when and how？ A comparison of methods[J]. Porcine Health Management， 2018， 4（3）： 90-95.

[2] 金丽珠，吴家斌，黄睿敏，等. 尿素溶液漂浮法诊断哺乳仔猪球虫病[J]. 畜牧与兽医，2013，45（9）：112-114.