吴瑞鹏 冯斌 任占宏 谷成高福林 张毅

肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis muscular atrophy，ALS） 分为家族性 ALS （familial amyotrophiclateral sclerosis，FALS）和散发性 ALS（sporadic amyotrophic lateral sclerosis，SALS）。关于ALS的基因组学特征，现阶段研究较明确的有铜/锌超氧化物歧化酶1（Cu/Zn superoxide dismutase，SOD1）、 反式激活反应-DNA结合蛋白 （TARDBP）基因、C9orf72基因、肉瘤熔合（FUS）基因，占到家族性 ALS的20%，占到散发型ALS的1%[1-2]。与SOD1基因相关的亚型称为ALS1亚型，目前SOD1基因已经报告了200余种基因突变类型[3]，中国ALS人群中的研究共报告了SOD1基因突变26种[4-8]，国内报告较多的SOD1基因突变H46R 、V47A、G37R、Cys111Tyr和 Gly147Asp，多集中于华北地区及华东地区[9]。甘肃为亚高原，多民族杂居，ALS基因组学有其特征性表现，本研究收集甘肃地区FALS患者家系进行SOD1基因突变检测，分析SOD1突变患者的临床特点及突变与临床表型关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象纳入2018年1月至2020年6月收治的18例FALS家系的先证者，男7例，女11例，平均年龄（48.3±12.6）岁。所有病例由至少两位以上神经内科专科医生独立做出诊断，诊断标准依据EI Escorial修订诊断标准[10]。排除标准：①有肿瘤疾病史；②有严重心脑血管疾病；③精神异常及外伤病史；④有其他家族遗传病史。所有研究对象签署知情同意书，本研究得到我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 外周血DNA提取 抽取先证者外周血2 mL，酸性柠檬酸葡萄糖溶液（ACD）抗凝后，用 Qiagen试剂盒进行DNA提取，无水乙醇洗涤两次，-80℃保存。

1.2.2 SOD1基因PCR扩增引物及反应条件

表1 SOD1基因PCR扩增引物及反应条件

1.2.3 DNA序列分析 PCR产物Qiaquick柱纯化，采用美国ABI公司生产的3730 DNA自动测序仪进行 DNA序列分析，测序结果与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中心公布的人类基因组SOD1 cDNA序列进行比对。

2 结果

18例先证者中，3例检测出SOD1阳性，均为杂合突变，其中 2例 p.Gly73Ser突变，1例p.G42D突变，其余15例未检测出SOD1基因突变，SOD1基因阳性突变检出率为 16.67%（3/18例）。……