张喆,李依洁,魏玮,刘瑜,符思,苏晓兰

1.中日友好医院中医脾胃病科，北京 100029；2.中国中医科学院望京医院脾胃病科

腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是一组持续或间歇发作，以腹痛、腹胀、排便习惯和(或)大便性状改变为临床表现，而缺乏胃肠道结构和生化异常的肠道功能紊乱性疾病[1]，通过前期研究[2]发现针对IBS-D脾肾阳虚证制定的温肾健脾方中高剂量组通过调节免疫、抗炎、调节肠神经系统运动、改善胃肠道激素紊乱、降低内脏高敏感等方面起到了改善腹泻的作用，本次研究拟通过蛋白组学研究挖掘脾肾阳虚证IBS-D大鼠蛋白质的表达特征及温肾健脾方中、高剂量组可能的干预机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 4周龄(70 g)雄性SD大鼠50只，级别SPF/VAF，许可证号：SCXK(京)2011-0004，购自斯贝福实验动物科技有限公司。恒温(23～25 ℃)饲养，灯光环境和避光各12 h，大鼠自由进食标准颗粒饲料。北京中医药大学屏障环境动物实验室实验动物使用许可证号：SYXK(京)2016-0038。

1.2 主要试剂及仪器 水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，批号：20140827)；甲醛(北京益利精细化学品有限公司，产品标准编号：YZB/京0099-2011)；番泻叶(北京康美药业有限公司，产品批号：140181491)；尿素(Bio-Rad，货号：161-0731，美国)；蛋白定量染液(Thermo Scientific，货号：23238，美国)；牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)(Sigma-Aldrich，货号：A2058，美国)；Ziptip(Millipore，PN：ZTC18M096(2 μg)。

U-TvO.5xC.24H01726显微镜(OLYMPUS公司)；RM2255切片机(Lejca公司)；H1122Q烤片机(Leica公司)；Eql50H脱水机(Lelca公司)；10K超滤管(Sartorious，PN：VN01H02)；6标TMT®试剂盒(TMTsixplex Label Reagent Set)(Thermo Scientific Pierce，PN：90066)；超声波细胞破碎仪(南京先欧仪器制造有限公司，型号：XO)；酶标仪(Thermo，型号：Multiskan MK3)；真空冷冻干燥机(Thermo，型号：SPD2010-230)；RIGOL L-3000高效液相色谱系统(北京普源精电科技有限公司)；高效液相色谱仪(Thermo Scientic EASY-nLC 1000 System(Nano HPLC)；质谱系统(Thermo，型号：Q-Exactive)。……