郑向荣，杨洪安，丁锋

山东第一医科大学附属省立医院神经外科，济南250021

胶质细胞瘤是一种常见的颅内原发性肿瘤，占所有颅内肿瘤的50%以上，世界卫生组织（WHO）根据其恶性程度及病理特征分为Ⅰ～Ⅳ级［1］。胶质母细胞瘤（GBM）是最常见、侵袭性最强、预后最差的中枢神经系统肿瘤，属于Ⅳ级胶质瘤，即使采取手术切除+放化疗的传统综合治疗策略，中位生存期仍然不到18个月，3年生存率<10%［2-3］。目前，分子靶向治疗是肿瘤治疗研究领域中的热点，而分子治疗靶点的选择是基础和关键。牙周韧带相关蛋白-1（Asporin）在骨与软骨疾病进展中发挥重要作用，近年研究证实其能促进多种肿瘤的恶性进展，但在胶质瘤中的研究鲜有报道。本研究观察了Asporin在GBM组织中的表达变化，并分析其与GBM患者替莫唑胺（TMZ）耐药和预后之间的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2012年10月—2015年10月山东第一医科大学附属省立医院神经外科收治并经术后病理确诊的GBM患者40例，男18例，女22例；年龄（52.3±10.1）岁；胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性23例（57.5%），阴性17例（42.5%）；少突胶质细胞转录因子-2（Olig-2）阳性16例（40.0%），阴性24例（60.0%）；P53阳性21例（52.5%），阴性19例（47.5%）；IDH1阳性13例（32.5%），阴性27例（67.5%）。另选10例高血压脑出血患者，男5例，女5例；年龄（49.5±9.3）岁。手术留取GBM患者和高血压脑出血患者（为减轻颅内压所切除的正常大脑组织）脑组织标本。本研究均经患者知情同意并签署知情同意书，且通过了山东第一医科大学附属省立医院伦理委员会的评议。

1.2 主要试剂及仪器 Asporin抗体（Abcom公司，美国）；GAPDH抗体（中杉金桥公司，中国）；免疫组化试剂盒、苏木素、柠檬酸盐修复液、磷酸盐缓冲液（PBS）、中性树胶、DAB试剂盒（中杉金桥公司，中国）；一抗稀释液（北京索莱宝公司，中国）；RIPA裂解液、PMSF、5×蛋白上样缓冲液、1.5 mmol/L Tris-HCl（pH 8.8）、10%SDS、30%Acr-bis、过 硫 酸 铵（APS）、1 mmol/L Tris-HCL（pH 6.8，碧云天公司，中国）；蛋白Marker、BCA蛋白定量试剂盒（Thermo Fisher Scientific公司，美国）；脱脂奶粉（内蒙古伊利公司，中国）；山羊抗小鼠IgG、山羊抗兔IgG（中杉金桥公司，中国）。ECL发光液、PVDF膜（Millipore公司，美国）；显影液、定影液（乐凯胶片公司，中国）；……