HPLC-CMC筛选6种中药材治疗慢性牙周炎的活性成分
2021-09-01俞海龙李雅萍刘文婕王欣欣张艺村
刘 丽,俞海龙,李雅萍,王 静,刘文婕,王欣欣, 李 成,张艺村
慢性牙周炎通过药物等其他刺激因素干预体外分离培养的牙周膜细胞,来达到牙周组织再生、重建已成为牙周炎治疗的研究热点[1]。目前临床用于控制牙周炎的药物主要为抗生素类的化学制剂,中药制剂应用较少[2]。传统的药物提取、分离纯化繁琐低效,而细胞膜色谱法(CMC)作为一种新兴的生物亲和色谱法,不需要预先对样品进行分离和纯化,能够在特定的活性细胞膜筛选模型上直接确定与膜受体发生结合的中药某种活性部位,从而达到快速、高效、准确的筛选[3]。本实验以辛伐他汀为阳性对照药对该方法进行筛选测试分析,并考察其适用性,从而筛选6种中药与牙周膜细胞能结合的活性成分,为后期治疗慢性牙周炎局部凝胶制剂的开发提供了理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料:CO2培养箱(BB16)(德国Heraeus),倒置相差显微镜(日本Nikon),细胞计数板(上海安信光学仪器制造有限公司),JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司),细胞膜色谱柱芯组件(10 mm柱长,2 mm内径,0.22 μm筛板孔径)(深圳逗点生物技术有限公司),RPL-ZD10型装柱机(大连日普利科技仪器有限公司),VICI AG10G-0911V10 通切换阀(美国Valco仪器公司),Concentrator真空旋转蒸发仪(德国eppendorf公司),Shim-pack VP-ODS液相色谱柱预柱(10 mm柱长,1 mm内径,5 μm粒径,C18键合硅胶固定相)(日本Shimzdzu公司),LC-MS-2010EV高效液相色谱-质谱联用仪系统(包括2部 LC-20 液相色谱泵,1部DGU-20A3在线脱气机,1部SIL-20A自动进样器,1部CTO-20A色谱柱温箱,1根Shim-pack VP-ODS高效液相色谱柱,1部 SPD-20A UV检测器,1部SPD-M20A DAD检测器,1部LC-MS-2010EV质谱仪及LC-MS Solution色谱工作站)(日本Shimzdzu公司)。……
