朱 婵,施定基,何培民,贾 睿∗

(1上海海洋大学海洋生态与环境学院,上海201306;2中国科学院植物研究所,北京100093)

微藻作为水产动物的开口饵料,可以促进水产动物幼体生长,提高其存活率[1],增强其抗逆性[2],而且可以改善水质[3],抑制有害菌的生长[4]。同时,由于微藻结构简单、生长迅速,因而一些微藻成为了水产动物口服疫苗的表达载体[5]。为建立口服疫苗产业,微藻的规模化培养是需要考虑的首要问题[6]。张春莉等[7]首次将白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白基因vp28在鱼腥藻7120(Anabaenasp.PCC 7120)中表达,并通过口服用药的方式提高了对虾对WSSV的免疫力[8],但vp28基因在其中的表达效率很低,远不能满足生产需求。邓元告等[9]把vp28基因转入聚球藻7942(Synechococcussp.PCC 7942)中,并表达成功;庄旻敏等[10]研究表明,vp28基因在聚球藻7942中的表达率是在鱼腥藻7120中的3倍。

VP19蛋白是白斑综合征病毒中含量仅次于VP28蛋白的囊膜蛋白[11],如果能有效提高目的基因的表达率,则可进一步降低转基因蓝藻的培养成本,从而真正实现口服剂的产业化[12]。现有研究表明,目的基因的表达率可能与生长时间有关[10,12];在微藻的培养研究中,需要确定转基因微藻的生长活力,温度、光照强度、pH和盐度是影响微藻生长和生化组成的重要环境因素[13-15]。

本研究采用荧光定量PCR的方法检测转基因聚球藻7942在不同生长阶段vp19基因的相对表达量,并在此基础上通过氧电极分析转vp19基因型聚球藻7942的光合速率随温度、光照强度和收集天数的变化特征,探究其最适生长条件,以期为后续转基因蓝藻口服疫苗的规模化生产奠定基础。……